ELISA анализ: какво е това? защо е необходимо? плюсове и минуси на метода

ELISA анализ - какво е това? Пълното име на този диагностичен метод се нарича ензимно-свързан имуносорбентен анализ и се основава на определянето в периферната кръв на антитела от различни класове или имуноглобулини, които се произвеждат от човешкото тяло..

В практиката на лекар, ELISA анализът заема много важно място, когато е необходимо да се диагностицира всяка инфекциозна патология. Този анализ показва не само наличието на инфекциозно заболяване, но и етапа на патологичния процес. Също така, не само по отношение на патогена, методът ELISA е показан за употреба: той се използва за диагностициране на алергични състояния. Този тест ви позволява да идентифицирате проблеми в имунната система, при много заболявания на хемопоетичната система, автоимунни и други нарушения.

Защо е необходима IFA?

Всички изследователи са склонни да вярват, че името "антитяло" е твърде жалко. И все пак, тя отразява една важна характеристика на имуноглобулините: те са способни да свързват и неутрализират вредните вещества, като ги приближават като „ключ“ към „ключалка“. Количеството антитела в кръвта отразява не само общата способност на организма да се защитава срещу инфекции, но и способността да образува циркулиращи имунни комплекси, които могат да се появят при различни автоимунни заболявания, например при ревматоиден артрит или анкилозиращ спондилит..

Комплекси от антитела с антиген (вреден фактор с инфекциозен характер) са резултат от реакцията на организма към въвеждането на "външни лица". Следователно имунната система се научава да ги разпознава, с помощта на лимфоцити, тя обучава имунокомпетентни клетки и те са в състояние да произвеждат силно специфични антитела. И така, антителата към вируса на Епщайн са подредени по различен начин, отколкото антителата към вирусен хепатит С или към Е. coli и анти-HAV, или антитела към вируса на хепатит А - по различен начин от автоантителата към хрущялната тъкан. Именно високата специфичност и съответствието на имуноглобулините с инфекциозен агент прави висока стойност за такива лабораторни изследвания като ензимен имуноанализ.

След силна връзка на антитела и антигени в един комплекс (антиген-антитяло), вредните фактори губят способността си да увреждат тъканите на тялото, а след това тези комплекси или се неутрализират или лизират от фагоцитоза от неутрофили и, „усвоявайки се“, напускат тялото.

Кръвният тест с ELISA може да покаже с какъв специфичен патогенен фактор е изправено нашето тяло, на какъв етап е процесът на взаимодействие между тялото и инфекцията. След проучването лекарят може да направи прогноза с висока степен на увереност, да предпише определени видове лечение и в някои случаи дори да определи продължителността на живота на пациента, особено при хронични вирусни инфекции, например при вирусен хепатит С.

Но в някои случаи в организма изобщо няма инфекциозни агенти и антителата „по погрешка“ атакуват собствените им органи и тъкани, тъй като имунокомпетентните клетки получават фалшива информация. Такива заболявания се наричат ​​автоимунни, а ензимният имуноанализ също помага да се разпознае тази хронична патология и да помогне в диагностиката.

Повече за имуноглобулините

Общо човешкото тяло произвежда 5 известни класа антитела, които са обозначени като Ig (което означава имуноглобулини), които принадлежат към класове A, M, G, E и D. Всички те са от голямо значение при интерпретирането на резултатите от ELISA анализ. Разбира се, има много повече комплекси и не всички от тях все още са отворени. Но при диагностицирането на различни заболявания първите три вида антитела са най-ценни. Кръвният тест за ELISA използва възможно най-много информация: моментът на поява на антитела в кръвта, промяната в тяхната концентрация в зависимост от времето, периода на изчезване, както и вида на специфичните антитела.

И така, участниците в първичния, остър инфекциозен процес са имуноглобулини от клас М, които винаги показват остра фаза, дори ако болестта е клинично изтрита. Типичен пример е аниктеричната форма на остър вирусен хепатит В или С. Ензимно-свързан имуносорбентен тест за хепатит ще покаже, че човек има остър хепатит и симптоми като болка в хипохондриума, сухота в устата, болки в ставите и други неспецифични симптоми стават лесно разбираеми.

Няколко седмици по-късно тези антитела се откриват във все по-изчезваща концентрация, отстъпвайки на имуноглобулините от клас G. Те се определят в кръвта в продължение на много месеци и дори години и показват или възстановяване, и след това те могат да останат за цял живот, образувайки силна имунна система. Това показва мощна защита срещу патогенни антигени. И така, именно антителата от този клас правят човека имунизиран срещу повтарящи се случаи на антракс и чума. Но има моменти, когато тези антитела не предотвратяват вредното им въздействие в присъствието на антигени. В този случай можем да говорим за увеличаване на активността на хроничен процес..

Що се отнася до IgE, той има приложение при диагностицирането на различни паразитни инвазии и алергични състояния, а IgD изпълнява спомагателна функция: ензимно-свързаният имуносорбентен анализ позволява използването му в сложната диагностика на бронхиална астма и автоимунни състояния. Разбира се, дешифрирането на ELISA анализа е много по-сложно и специалистите - имунолозите могат да разкажат много повече. Какви са индикациите, че пациентът може самостоятелно да кандидатства в лабораторията за извършване на изследвания?

Показания за анализ

На първо място, трябва да разберете, че няма такъв анализ - „просто кръв за ELISA“. Има анализ за хепатит, случва се - за уреаплазма или за сифилис. По този начин, даряването на кръв за ELISA може да бъде насочено само чрез "нареждане" за търсене на желаната инфекция. Просто е толкова неразбираемо защо да дарявате кръв от вена, без да знаете какво да търсите. Ето защо ензимният имуноанализ е мощен инструмент, който е важен при диагностичното търсене. Само лекар може да предпише този анализ, тъй като той целенасочено търси инфекция, която се характеризира с тези симптоми. Обикновеният човек, разбира се, може да поръча 150 кръвни теста чрез ELISA за „всички инфекции“, но това би било неразумен и скъп подход към диагностиката, вземайки тестове за всичко.

Най-търсеното назначаване на тези тестове за следните заболявания и състояния:

Различни микробни и вирусни инфекции, симптоми на инфекциозни заболявания - обрив, треска, жълтеница, подути лимфни възли, синдром на диария, съмнения за полово предавани болести.

Техниката ELISA помага при определянето на уреаплазма и микоплазма, сифилис и хламидия, туберкулоза и цитомегаловирусна инфекция, херпес, вирусен хепатит и вирус Epstein-Barr. Понастоящем около 500 различни инфекции могат да бъдат проверени с помощта на ензимен имуноанализ.,

Ако подозирате хелминтска инвазия и наличие на симптоми като алергии, еозинофилия в кръвта, сърбеж, диспепсия и загуба на тегло,

Прочетете повече за този тип изследвания в статията "Кръвен тест за глисти и паразити: методи за изследване, ELISA, на кого и как да дарявате?".

Когато се идентифицират алергени, които причиняват оток на Квинке, уртикария, задух и пристъпи на астма.

В този случай се откриват специфични Ig E и има цели алергични панели, които ще помогнат за точното определяне на алергена - калмари или скариди, суха храна за риби, съдържащи дафния, домашен прах. При полиноза този метод ви позволява да намерите точно зърнените култури, храсти или дървета, които причиняват пролетно кихане и сълзящи очи,

  • Този метод е показан при съмнение за автоимунни заболявания, които се лекуват от ревматолози,
  • Ако се подозира растеж и активност на тумора,
  • В комплексната диагностика на имунодефицитни състояния и ХИВ - инфекция,
  • За кръвни заболявания и при трансплантация, за цялостна оценка на имунитета, например преди чернодробна или бъбречна трансплантация.

Сега знаем защо трябва да дарите кръв за ELISA. Разберете как се провежда това проучване.

Как се прави анализът?

Класическият материал е венозната кръв на пациента. Но ако е необходимо, можете да изследвате голямо разнообразие от течности и тъкани: слуз, слюнка, цервикален секрет, цереброспинална течност, стъкловидно тяло на окото, съдържанието на пъпната връв и околоплодната течност. Важно е да запомните, че приемането на различни лекарства, прекомерната физическа активност, злоупотребата с алкохол могат силно да изкривят резултатите от теста..

Има няколко метода, които позволяват този анализ. Най-често използваният метод в клиничните лаборатории е фотометричният метод. В този случай се използват вещества, маркирани с боя, след реакцията на които и маркирането на комплекса антиген-антитяло, цветът им се променя. В резултат на това оптичната плътност на разтвора също се променя и тази промяна е право пропорционална на концентрацията на откритите антитела. За измерване на тези отклонения успешно се използват лабораторни спектрофотометри.

Също така, за ELISA се използва флуорометричен метод, който се основава на флуоресценция. И тук се изчислява интензивността на флуоресцентни вещества, които са се утаили върху изследваните проби..

И накрая, имунологичният анализ използва електрохимични методи за определяне на активността на ензимите, които са специфични етикети за антигени и антитела. Самият ензимен имуноанализ най-често включва използването на ензими като алкална фосфатаза, пероксидаза от хрян и галактозидаза. Тези ензими са способни да се свързват с антитела или антигени и да ги маркират поради тяхната активност.

Недостатъци на метода и неговите плюсове

Очевидните "плюсове" включват демократичната цена на анализа, възможността за скрининговото му използване при големи групи от населението, например при изследване на бременни жени за ХИВ. Методът на ензимен имуноанализ е доста специфичен и може да се използва за контрол на качеството на лечение на много заболявания. Важно е анализът да се подготви бързо и да е прост и безопасен за пациента..

Има обаче много клопки. Така че, ако имуноглобулините не бъдат открити, това не означава 100% отсъствие на болестта. Наистина, на фона на имунодефицита, тялото просто може да не „има сили“ да синтезира антитела. Ако пациентът има тежка чернодробна недостатъчност, тогава черният дроб просто не е в състояние да синтезира протеин - градивен елемент за антитела. В този случай резултатът се нарича серонегативен и потвърждаването на инфекцията се изисква чрез директен и най-усъвършенстван изследователски метод - PCR, или полимеразна верижна реакция. За разлика от ензимно-свързания имуносорбентен анализ, този метод не разкрива реакцията на организма към инфекциозния процес (който може да е дефектен или да липсва изобщо), при PCR наследственият материал се определя директно или се локализира самият патоген.

Методът на ензимен имуноанализ може да даде грешка на фона на много хронични заболявания, на фона на имуносупресивна терапия. В хелминтологията и паразитологията има закон: само откриването на паразит или неговите яйца е абсолютно надежден начин за поставяне на диагноза. ELISA може да осигури кръстосани и фалшиво положителни методи, отговарящи на много нормални събития в живота на пациента.

В заключение трябва да се каже, че ензимно-свързаният имуносорбентен анализ е мощен, но спомагателен начин за лабораторна диагностика на много заболявания. Но във всеки случай диагнозата трябва да се основава на много фактори: оплаквания и анамнеза на пациента, данни от прегледа, други спомагателни и инструментални диагностични методи.

Какво представлява кръвен тест за ELISA

Развитието на съвременната медицина в света на диагностиката не спира да удивлява с постиженията си и сега лекарят няма нужда да прави предположения относно вероятната диагноза, разчитайки само на косвени признаци. Създаването и въвеждането в света на лабораторни изследвания на ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) ви позволява бързо и точно да определите не само присъствието на патогена, но и много други характеристики на заболяването.

История на създаването и развитието на IFA

Този метод за изследване на кръвта започва да се използва в практическата медицина още в средата на миналия век - някъде през 60-те години. Първоначалната му цел беше научно изследване в областта на хистологията, което беше ограничено до търсенето и изследването на клетъчната антигенна структура на биологичните видове. Кръвният тест чрез ELISA се основава на взаимодействието на сродни антигени (AG) и специфични антитела (AT), с образуването на комплекс "антиген-антитяло", определен от ензима.

Това явление накара учените да решат, че методът може да се използва за разпознаване на протеинови съединения от различни класове, образувани в кръвен серум, когато патогенът попадне в тялото. Поради прякото им участие във функционирането на имунната система, тези съединения се наричат ​​имуноглобулини (Ig, Ig) и откритието е най-големият пробив в лабораторната диагностика..

В същото време този силно чувствителен метод започва активно да се използва едва през 80-те години и е достъпен само във високоспециализирани лечебни заведения. Първите успяха да използват ензимни анализатори на имуноанализи в станции и центрове за кръвопреливане, венерически и инфекциозни медицински институции. Това се дължи на бързото разпространение на „чумата на 20-ти век” - СПИН и се наложи спешни диагностични и терапевтични мерки..

Възможности на техниката

Областта на приложение на кръвния тест за ELISA е доста широка - в момента е невъзможно да си представим колко сложно би било търсенето на причината за много заболявания. Подобни изследвания сега се използват в почти всички медицински области, дори в онкологията. Въпреки че е невъзможно за неинформираните да разберат, в някои случаи, след като са го извършили, е било възможно да спасят живота на пациентите, като са открили тумор в ранните етапи..

В съвременните диагностични центрове лабораторните изследвания са представени не само от туморни маркери - те са оборудвани с впечатляващ арсенал от панели за провеждане на тази диагноза. С тяхна помощ е възможно да се определят много патологични състояния, като хормонални аномалии и инфекциозни процеси от различен произход..

В допълнение, провеждането и декодирането на кръвен тест ELISA ще направи възможно проследяването на ефекта на лекарствата върху тялото на болен човек и дори животно. Последният се използва широко във ветеринарните клиники, като спомага за поддържането на здравето на нашите домашни любимци или хранители, като осигурява стабилни доставки на незаменими в диетата месо, млечни продукти и яйца..

Така че, в резултат на приемането на само няколко милилитра венозна кръв и нейната диагноза по метода ELISA, лекарят, след като е описал материалите за изследване, ще може да определи:

  • хормонално състояние, включително биологично активни вещества на половите жлези и щитовидната жлеза, както и надбъбречните жлези;
  • наличието на бактериални и вирусни инфекции (хепатит В и С, сифилис, херпес, хламидия, туберкулоза, мико- и уреаплазмоза, ХИВ, TORCH) и други заболявания от този характер;
  • признаци на жизнена активност на патогени на патологичния процес, завършил с възстановяване и преминал в стадия на образуване на антитела (имунен отговор).

Такива комплекси са много по-лесни за разпознаване и елиминиране от имунните клетки. Остатъчните ефекти под формата на антитела в множество случаи се съдържат в кръвта за цял живот, което практически намалява риска от повторна инфекция до нула.

Разновидности на имуноглобулини

Има няколко вида антитела и всяко от тях участва в процеса на имунния отговор на определен етап. Например, имуноглобулините от клас М (IgM) са първите, които се образуват в отговор на навлизането на хипертонията в тялото. Най-високите им нива се наблюдават през първите дни на заболяването..

Тогава имунната система пуска в плазмата клас G Ig (IgG), които са отговорни за пълното унищожаване на антигените и възстановяването на пациента. По-късно те продължават да бъдат в кръвта, като по този начин подготвят имунитета за многократното попадение на идентичния патоген. Ето как работи ваксинацията. С въвеждането на отслабени антигени на патологични микроорганизми, много имуноглобулини се появяват и остават циркулиращи в плазмата.

И впоследствие, ако възникне патогенен контакт, те бързо се справят с инфекцията, спасявайки тялото от заплахи за здравето. IgA се концентрира в големи количества в лигавиците, блокирайки навлизането на патогенни вируси и бактерии в тялото. IgE са отговорни за убиването на паразитни инфекции и има много други имуноглобулини, участващи в имунния отговор.

Основните обекти, представляващи интерес за лабораторна диагностика, са Ig класове M, G и A. По нивото на тяхната концентрация можете да определите стадия на заболяването и да разберете от какви инфекциозни заболявания е страдал човек през живота си. Например можете да проверите дали в миналото е имало варицела или рубеола. Лекарят, за да разбере дали определен тип AT или AH присъства в тялото на пациента или концентрацията на който и да е хормон, не е необходимо да предписва множество лабораторни изследвания - достатъчно е да напише направление за ELISA.

Същността на техниката

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ за паразити и други микроорганизми - вредители по здравето на организма дава възможност не само да се установи наличието на патогени, но и да се каже за техния брой в кръвната плазма на пациента. По този начин такова проучване позволява както качествен, така и количествен анализ на патогенни микроорганизми, открити в серума..

Нивото на концентрация на патогена значително влияе върху развитието на инфекцията и скоростта на възстановяване, поради което качествената оценка се счита за не по-малко важна от количествената. На нея се дава далеч не последната роля както в лечението на деца, така и на възрастни. Но как е възможно ELISA да разпознае толкова широк спектър от микроорганизми, които паразитират в тялото на хората и животните, причинявайки вреда и намалявайки качеството на живот??

Методологията на изследването се основава на няколко варианта (преки и косвени - състезателни и неконкурентни) за изпълнение на възложените задачи, всеки от които е предназначен за конкретни цели. Този подход позволява целенасочено търсене и в най-кратки срокове да се установи причината за определена патология. За откриване на Ig от различни категории клас се използва плоча с 96 ямки (полистиролов панел) и в ямките му са разположени сорбирани рекомбинантни протеини. Те играят ролята на антигени и в началния етап са в твърда фаза.

Когато попадне в кладенеца с кръвна плазма, антигените или антителата идентифицират обекта във връзка с тяхната ориентация и образуват комплекс (AG - AT). Тази формация се фиксира от ензимно съединение (конюгат), което впоследствие ще се прояви като променено оцветяване на кладенчето. ELISA се произвежда върху специфични тестови системи, произведени в специализирани лаборатории и оборудвани с пълен набор от реактиви.

Този анализ може да се извърши върху шайби - шайби и отчитане на спектрофотометър, но те изискват ръчен труд. Разбира се, няколко пъти е по-удобно и по-бързо лабораторен асистент да извършва всички манипулации на напълно автоматизирани устройства. При използването им лабораторният персонал се освобождава от голямо количество монотонна дейност - измиване, накапване и останалата част от рутината, но не всички лечебни заведения могат да си позволят толкова скъпо оборудване

Тълкуването на изследователски материали е изключително компетентност на специалист по лабораторна диагностика - само на него могат да се разкажат резултатите за спецификата и тънкостите в хода на заболяването. В този случай лекарят трябва да вземе предвид възможността за получаване на фалшиво отрицателни или фалшиво положителни отговори..

Декодиране на материали

Резултатът от висококачествен ензимен имуноанализ трябва да бъде недвусмислено заключение дали в тази кръвна проба е открит желаният микроорганизъм или не. Количественият анализ ще покаже нивото на концентрация и може да бъде изразен по два начина - чрез стойност в цифри или чрез броя на знаците "+".

Анализирани показатели

По време на изследването се извършва внимателно проучване на основните имуноглобулини, участващи в имунния отговор, като например:

  • IgM - откриването на този клас означава развитие на остра форма на инфекциозно заболяване. Отрицателният резултат от търсенето на IgM може да бъде както доказателство за отсъствието на желания патоген, така и за прехода на болестта в хроничен ход.
  • IgA - определянето на този клас при липса на IgM в повечето случаи е сигнал за хронична или латентна форма на развитие на инфекциозно заболяване.
  • IgM и IgA (едновременно присъствие) - положителни резултати и за двата типа показва самия връх на острата форма на патология.
  • IgG - неговото присъствие показва трансформация на болестта в хронична форма или възстановяване и формиране на имунитет към определящия агент.

Появата и натрупването на определен клас IS се случва на различни времеви етапи. Така например, IgM се появява първи, около 5 дни след като патогенът удари. IG остават в кръвта за около 5-6 седмици и след това постепенно изчезват. Понастоящем те са достъпни за определяне чрез ELISA. Около 3-4 седмици след началото на заболяването се появява IgG, който впоследствие може да остане няколко месеца. Но при анализа те не винаги се намират.

IgA се образуват в кръвта в периода 2-4 седмици, докато 20% от тях се съдържат в серума, а 80% в секрецията на лигавиците. По правило тези имуноглобулини изчезват в рамките на 2-9 седмици, което показва унищожаването на патогена и възстановяването на пациента. Ако ELISA все още показва наличието на IgA, това сигнализира за прехода на процеса в хронична форма..

Опции за резултатите от анализа

В зависимост от получените данни отговорите на ELISA могат да бъдат издадени на формуляр под формата на таблица с пълен списък на всички AT и AG и индикация за положителна или отрицателна реакция. В определени ситуации ще се покаже количествена стойност - рязко положителен, положителен, слабо положителен или отрицателен резултат. Вторият вариант показва количеството антитела, съдържащи се в изследваната кръвна проба.

В допълнение към горните стойности в процеса на ELISA се изследва и друг количествен параметър - индексът на авидност AT, изчислен като процент. Той показва колко дълго продължава болестта - тоест колкото по-висок е показателят, толкова повече време се развива патологията.

Алтернативен метод ELISA

Ензимният имуноанализ е доста известна и често срещана диагноза. Може би някои никога не са чували за него, но има друга версия на това проучване, която е още по-малко известна на широк кръг хора, при която се взема проба от некръв. Тази техника се нарича анализ на изпражненията за окултна кръв и в много случаи ви позволява да избегнете допълнителни изтощителни процедури, които също са придружени от неприятни усещания..

ELISA тест за окултна кръв (молекули на хемоглобина) дава възможност да се открие кървене от храносмилателната система, дори незначително, признаците на което в изпражненията на пациента, както се казва, не могат да бъдат открити с невъоръжено око. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ при човешки изпражнения за кратко време може да покаже пептична язва, полипоза, дивертикулоза, тумори, които не са придружени от определени симптоми в ранните етапи.

Към днешна дата са създадени хиляди разновидности на системи за тестване на ензимни имуноанализи, които дават възможност за намиране на AT и AG на огромен списък от патологии. Следователно този анализ се използва в почти всички клонове на медицината за всяка възрастова категория. И абсолютната безвредност ви позволява да прибягвате до нея както по време на бременност, така и за диагностика на изтощени пациенти.

Какво представлява методът ifa

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) е един от видовете имунохимичен анализ. Тя се основава на силно специфична имунологична реакция на антиген (AG) със съответно антитяло (AT) с образуването на имунен комплекс. В този случай един от компонентите е конюгиран с ензима. В резултат на реакцията на ензима с хромогенен субстрат се образува оцветен продукт, чието количество може да бъде определено спектрофотометрично.

Всяка версия на ELISA съдържа 3 задължителни етапа:

  1. Етапът на разпознаване на тестваното съединение от специфично антитяло;
  2. Етапът на образуване на връзка на конюгата с имунния комплекс или със свободни места за свързване;
  3. Етапът на превръщане на ензимен етикет в записан сигнал.

Реакцията включва:

  • Твърда фаза;
  • AG и AT;
  • Конюгат (антиген или антитяло, белязано с ензим);
  • Ензимен маркер;
  • Субстрат;
  • Стоп реагент (най-често се използва сярна киселина).

Твърда фаза

Като твърда фаза за ELISA могат да се използват различни материали: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и други. Твърдата фаза може да бъде стените на епруветка, 96-ямкови и други плочи, мъниста, мъниста, както и нитроцелулоза и други мембрани, които активно адсорбират протеини..

Антигени и антитела

AG и AT, използвани в ELISA, трябва да бъдат силно пречистени и силно активни. AH трябва да има висока антигенност, оптимална плътност и брой антигенни детерминанти.
Чувствителността на ELISA зависи от концентрацията, активността и специфичността на използваните антитела. Използваните антитела могат да бъдат поли- или моноклонални, от различни класове (IgG или IgM) и подкласове (IgG1, IgG2).
Чувствителността и специфичността на метода се увеличава с използването на моноклонални антитела. В този случай става възможно да се открият ниски концентрации на AG (AT) в пробите.

Ензимни маркери: пероксидаза от хрян (HRP), алкална фосфатаза (ALP) и β-D-галактозидаза са най-широко използвани.

Подложки

Изборът на субстрат се определя преди всичко от ензима, използван като етикет, тъй като реакцията "ензим-субстрат" е силно специфична..

  • За HRP като субстрат се използва 3,3 ', 5,5'-тетраметилбензидин (TMB хромоген). Настъпва цветна реакция, чиято интензивност зависи от количеството свързан аналит;
  • За ALP субстратът е 4-нитрофенил фосфат;
  • β-D-галактозидазата катализира хидролизата на лактозата, за да образува глюкоза и галактоза.


Класификация по ELISA

Класификацията на методите ELISA се основава на няколко подхода:

1 - по типа на реагентите, присъстващи на първия етап на ELISA:

  • В конкурентната ELISA, на първия етап, системата съдържа както анализираното съединение, така и неговия аналог, маркиран с ензим и конкуриращ се за специфични места на свързване с него;
  • Неконкурентните методи се характеризират с присъствието на първия етап само на анализираното съединение и специфични места за свързване.

2 - съгласно принципа за определяне на изпитваното вещество:

  • Директно определяне на концентрацията на дадено вещество (AG или AT). Използват се антитела към изпитваното вещество, комбинирани със специфичен етикет. В този случай етикетът ще бъде в образувания специфичен комплекс AG-AT. Концентрацията на аналита ще бъде право пропорционална на записания сигнал;
  • Косвено определяне на концентрацията на дадено вещество - чрез разликата между общия брой на местата за свързване и останалите места за свободно свързване. В този случай концентрацията на аналита ще се увеличи и записаният сигнал ще намалее, поради което в този случай се наблюдава обратна зависимост от стойността на записания сигнал.

3 - по вид на резултатите:

  • Количествено;
  • Полуколичествен;
  • Качество.


Състезателен ELISA

  1. Специфични моноклонални антитела се имобилизират върху твърдата фаза;
  2. В ямките на панелите антигенът, белязан с ензима и тестовата проба се въвеждат с известна концентрация. Положителните и отрицателните контроли се поставят паралелно в съседни кладенци. За конструиране на калибрирането се използва стандартен немаркиран антиген в различни разреждания. Извършват се инкубация и измиване;
  3. Добавете субстрат, инкубирайте, спрете реакцията, когато се развие оптимално оцветяване в кладенци с положителен контрол;
  4. Резултатите се записват на ELISA четец. Концентрацията на аналита е обратно пропорционална на оптичната плътност.

Конкурентна ELISA за откриване на антитела: целевите антитела и белязаните с ензими антитела се конкурират помежду си за антигени, адсорбирани върху твърдата фаза.


Неконкурентен "сандвич" - вариант ELISA

Основното предимство на метода е неговата висока чувствителност, която надминава възможностите на други ELISA схеми..

  1. Моноклонални антитела или афинитетно пречистени поликлонални антитела се имобилизират върху твърдата фаза;
  2. Тестовата проба се поставя в ямките на панелите, паралелно се поставят положителна контролна и отрицателна контролна проба в различни разреждания. Инкубирайте и измийте;
  3. Към ямките се добавят белязани с ензими моноклонални или поликлонални антитела - конюгат. След инкубация се извършва промиване за отстраняване на несвързаните антитела;
  4. Субстратът се въвежда, инкубира. Реакцията се спира, когато се постигне оптимално оцветяване в ямките за положителен контрол;
  5. Резултатите се записват на ELISA четец. Концентрацията на аналита е право пропорционална на оптичната плътност.

Качественият анализ често се използва при скринингови изследвания и диагностика на инфекциозни заболявания. Резултатът от изследването се определя чрез сравняване на оптичната му плътност с изчислената стойност на критичната оптична плътност (OPcrit., "Cut-off").

Формулата за изчисляване на "границата" е посочена в инструкциите за системата за изпитване. При изчисляването на "Cut-off", както осреднените стойности на оптичните плътности на положителните и отрицателните контроли, така и оптичната плътност на специална контролна проба - контрол на нивото на среза.
Ако абсорбцията на пробата е по-висока от границата, пробата се счита за положителна за специфични антитела..

За полуколичествена версия на процедурата се изчислява съотношението между средната оптична плътност на пробата и оптичната плътност на границата.

Пробите се считат за:

  • положително, ако съотношението е по-голямо от 1,1;
  • съмнително, ако съотношението е 0,9-1,1;
  • отрицателно, ако съотношението е по-малко от 0,9.

Съмнителните резултати от анализа не могат да бъдат еднозначно интерпретирани и за изясняване на резултата е необходимо изследването да се повтори след 1-2 седмици..


Методът ELISA определя:

  • Хормони;
  • Туморни маркери;
  • Антитела (IgG, IgM) към патогени - ToRCH инфекции, туберкулоза, сифилис, вирус на хепатит С (при HCV), микоплазма, хламидия, ламблия, Helicobacter pylori и др.;
  • Вирусни антигени - хепатит D, E, A (HDD, HEV, HAV), хепатит C (HCVcore), хепатит B (HBs, HBe HBcore);
  • Автоимунни заболявания.

ELISA анализ - какво е това, декодиране на ензимно свързан имуносорбентен тест за паразити, сифилис, ХИВ, туберкулоза. Норма в таблицата, резултати

Благодарение на развитието на съвременната медицина, лекарят, когато поставя диагноза, вече не трябва да се фокусира върху косвени прояви на заболявания или да провежда многоетапни лабораторни изследвания. Достатъчно е да се извърши един анализ, който ще потвърди или отрече предполагаемата първоначална диагноза.

Този метод е ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) - това проучване ви позволява да откривате специфични антитела и антигени, присъщи на различни патологии, което значително ускорява диагнозата.

Какво е ELISA

ELISA анализът е лабораторно изследване (метод), което помага да се определи наличието или отсъствието на определени антитела в организма за борба с вируса и тяхното количество.

Основата на изследването е естественият реакционен антиген (обект, вреден за тялото) - антитяло (протеин, който унищожава вредни предмети), което дава възможност да се открие наличието на различни вируси, бактерии.

ELISA е естествен имунен отговор на организма - взаимодействието на антитяло със съответния антиген. Така, по време на ELISA, антигени или антитела се добавят към епруветката с материала, след което се открива концентрацията на получените комплекси антиген-антитела.

Ако се образуват съвпадения, тогава възникват имунни комплекси, тогава възниква ензимна реакция на багрилото с комбинираната молекула. Това се дължи на промяната на цвета по време на ензимната индикация, че заболяването се идентифицира след изследване на нивото на определеното съединение.

Видове имуноглобулини

Човешките имуноглобулини се диференцират в няколко класа, които се различават един от друг по свойства, структура и антигенни характеристики на тежките вериги (Н-вериги). При всички бозайници, включително хората, са изолирани пет Н-вериги, които определят принадлежността на имуноглобулините към съответния клас: G, M, A, D, E.

Всеки клас се различава един от друг по биологични свойства, и способността да свързват антигени, и скоростта и силата на връзката с молекулата.

Функциите на всеки имуноглобулин (lg) са различни:

Количество в тялотоФункцииПолуживот (дни)Стойност
G70%Формирайте пасивен имунитет при новородено;

от съществено значение за имунния отговор

подобряват фагоцитозата,

21-24осигуряват дългосрочен хуморален имунитет при инфекциозни заболявания
М5-10%необходими за активиране на фагоцитозата,

в състояние да свърже 5 антигенни молекули,

петОсигурява първичен имунен отговор
И10-15Неутрализира токсините и вирусите

необходими за формиране на ранен имунитет

Местно формиране на имунитет

4-5Защита на лигавицата
Е0,2%причиняват алергии и анафилаксия; активират тъканните базофили2Защита от паразити
д0,2%участващ в производството на лимфоцити, е необходим като мембранен рецептор за антигени;3Ролята им е слабо разбрана

Появата на имуноглобулини се случва по един вид „верига“ - lgM lgG, така тялото реагира на появата на антиген в тялото. По време на лабораторната диагностика се оценява концентрацията на три основни имуноглобулина - G, M, A.

Показания за вземане на анализ за имуноглобулини

ELISA анализът става все по-популярен всяка година.

Такова проучване ускорява диагнозата и това е много важно за лечението на патологии като:

  • вирусен хепатит;
  • ХИВ инфекция;
  • цитомегаловирус,
  • Вирусът на Epstein-Barr,
  • херпесен вирус,
  • дребна шарка
  • рубеола,
  • туберкулоза,
  • салмонелоза,
  • дизентерия,
  • кърлежи енцефалит,
  • Helicobacter бактерии,
  • борелиоза,
  • тетанус,
  • сифилис,
  • дифтерия,
  • лептоспироза,
  • хламидия,
  • уреаплазмоза,
  • микоплазмоза,
  • коклюш.

Анализът също така ви позволява да определите инфекцията с паразити:

  • плоски червеи
  • Аскарис
  • хистолични амеби,
  • чернодробни тремори,
  • ламблия,
  • токсоплазма,
  • трихинела,
  • метил,
  • цестодози.

ELISA е своеобразен маркер на автоимунни патологии и злокачествени новообразувания.

Подготовка за теста

Когато се подготвяте за проучването, трябва да се придържате към следните правила:

  • ден преди вземане на кръв, не трябва да пушите и да пиете алкохол,
  • не спортувайте или друга физическа активност,
  • опитайте се да избегнете стреса,

Преди да преминете анализа на ELISA, трябва да избегнете стреса.

  • спрете да използвате лекарства не по-късно от 10 дни преди манипулацията.
  • Лекарите също препоръчват да се придържате към специална диета - за да се изключат мазните и пържени храни и ако изследването се провежда за хепатит, тогава е необходимо да не се ядат портокалови зеленчуци и особено цитрусови плодове. Дарявайте кръв сутрин на гладно.

    Фалшиво положителен анализ се дължи на неизпълнени препоръки, особено консумацията на мазни храни, което води до твърде висока концентрация на триглицериди в плазмата, поради което проводимостта на ELISA намалява.

    Процедура за вземане на проби

    Пълна кръв, серум или венозна кръвна плазма могат да се използват като материал за изследване. Материалът се взема, обикновено от кубиталната вена, за това се използват еднократна игла и вакуумна тръба, необходими са 5-10 ml кръв.

    За точността на резултата е важно да се придържате към правилната техника за вземане на проби - пункцията на самия съд и околните тъкани трябва да се направи с една манипулация, поради което се използва къса игла с голям диаметър, така че противоположната стена на вената да не се нарани и червените кръвни клетки да не бъдат повредени.

    Също така, за да се запази целостта на червените кръвни клетки, е необходимо кръвта да тече по стените на епруветката..

    По време на съхранението на материала трябва да се избягва възможната йонизация, освен това материалът не трябва да влиза в контакт с остатъците от дезинфектанти, поради което се използва само пластмасова тръба за еднократна употреба, маркирана с името на пациента, датата и часа на доставка на материала.

    Ако се изисква краткосрочно съхранение на изпитвания материал, тогава се използва хладилна камера с температура 2-4 ° C, ако се изисква по-дълго съхранение, материалът се замразява при температура от -20 ° C.

    Как се прави анализът

    След подготовката на тестовия материал, лаборантът преминава към необходимите манипулации. За това се използват редица специални комплекти антигени, които имат свойството да провокират реакцията на организма към дразнител, това са различни инфекции, хормони, алергени.

    Схемата на очакваната реакция "антиген-антитяло" изглежда така:

    • Първична реакция - откриваем Ig (Ab) и пречистен патогенен антиген (Ag).
    • За да се открият получените имунни комплекси, следва нова имунологична реакция, където свързаният специфичен Ig действа като антиген, а Ig конюгат (Ab) действа като антитяло за него.
    • Последният етап е ензимна реакция, заедно с катализатор на конюгирана молекула. Субстратът е хромоген (неоцветен), който се оцветява по време на реакцията и се определя интензивността на цвета и количественият показател на имуноглобулина в пробата.

    Към момента са разработени голямо разнообразие от ELISA варианти; няма ясна класификация за тях. Обикновено методите се разглеждат въз основа на разделянето им на хетерогенни и хомогенни - всички фази на анализа се провеждат с помощта на твърда фаза или с използване само на разтвор..

    Съвременните лаборатории за клинична диагностика обикновено използват хетерогенен (твърдофазен) ELISA, при който твърдата фаза означава абсорбция на антигени или антитела върху твърдата повърхност на специални ямки, разположени на полистиролова микроплаки, методът е разделен на директен и индиректен ELISA.

    С директния ELISA въведеният антиген фиксира по време на процеса на инкубация на повърхността на празни ямки; за това тестовите проби се поставят в чисти ямки за 20-25 минути, това е необходимо, за да се прикрепи антигенът към тяхната повърхност. След това се добавя необходимото антитяло. Освен това материалът остава за известно време, за да образува връзки..

    Антителата винаги се добавят в излишък, следователно, дори и да присъстват, несвързаните антигени остават в пробата и ако изобщо няма антигени, няма да има връзки. За да се премахнат "допълнителните" антитела, се извършва декантиране, след което остават само тези антитела, които са създали връзка с антигена.

    Това е последвано от ензимна реакция - добавяне на разтвор с ензим към ямките, след което получените връзки се оцветяват.

    При непрекия метод ELISA се използват антитела, които предварително се комбинират със субстрата на ензимната реакция; в този случай свързването на антитела с антигена се случва по време на процеса на инкубация, след което връзките на повърхността на ямките се мобилизират, а конюгатът и субстрат-хромогенният реагент, въведен след това, оцветяват реакцията.

    По този начин основната разлика между косвения и директния метод не е адхезия на материала към повърхността на чисти кладенци, а свързване с антигена, имобилизиран върху плочата..

    Ходът на реакцията се спира с използването на специализирани устройства, след което всяка ямка се подлага на фотометричен процес, последван от сравнителна характеристика на резултата, получен с по-ранни контролни проби.

    Ако в пробата се установи увеличаване на оптичната плътност, тогава концентрацията на специфични антитела в резултата от теста също се надценява.

    Когато анализът е готов

    Изследването не отнема много време, от вземането на кръв до получаването на резултата отнема от 1 до 10 дни, в зависимост от диагностичните мерки.

    Резултати от теста и тяхната интерпретация

    Получената от пациента диагностична форма показва отрицателен или положителен резултат за определени класове имуноглобулини, както и количествен показател за различни класове антитела.

    Възможни са различни интерпретации на резултатите:

    1. IgM (+) (IgA, IgG не са открити) - процесът на възстановяване;
    2. IgM (-); IgG (+), IgA (+) - хронична инфекциозна патология;
    3. IgM, IgG, IgA (всички със стойност) - липса на защитни механизми за инфекции;
    4. IgG (+/-) и IgA (+/-), IgM (+) - остър процес;
    5. IgM (-), IgA (-), IgG (+) - постинфекциозен имунитет;
    6. IgM, IgG, IgA (+) - хронична патология в остър стадий.

    Така например, ако са открити IgG и IgM, тогава пациентът може да има едно от следните заболявания:

    • вирусен хепатит;
    • цитомегаловирус;
    • херпес;
    • шарка;
    • хламидия;
    • стафилококова или стрептококова инфекция.

    Ензимен имуноанализ често се предписва за хормонални изследвания, нормите са показани в таблицата:

    Име на хормонЕтажНорма
    1тиреоглобулинм / жДо 70 IU / ml
    2тироксинм / ж64-146 nmol / l
    3трийодтиронинм / ж1,8-2,8 nmol / l
    4Безплатен тироксинм / ж11-25 pmol / l
    петБезплатен трийодритонинм / ж4.49-9.3 pmol / l
    6Тестостерон, дехидротестостеронF0,5-10 mU / l

    ELISA анализът е диагностично проучване, което ви позволява да оцените вероятността от образуване на онкологични патологии. Тълкуването на резултатите обаче се извършва само от лекуващия лекар..

    Значението на резултатите от теста

    ELISA е подходящ за откриване на различни форми на генитални инфекции, включително сифилис, и често се използва за скрининг на бременни жени.

    Благодарение на това проучване можете да разберете колко отдавна е настъпила инфекцията и стадия на заболяването по време на проучването:

    • имуноглобулините М показват продължителността на заболяването;
    • IgA - пациентът се заразява преди повече от 30 дни;
    • IgG се открива в „пика“ на заболяването или в момента, когато терапията е приключила наскоро.

    По време на изследването кладенците на плочата с отрицателен индикатор остават безцветни, а положителните стават ярко жълти. Ако цветът на положителните ямки не съвпада с цвета на контролата, резултатът се счита за съмнителен и е необходимо повторно изследване..

    Ензимният имуноанализ е първата стъпка в диагностиката на ХИВ. Анализът не може да се извърши веднага след предполагаемата инфекция; трябва да изчакате до края на инкубационния период (от 14 дни до 6 месеца).

    По време на анализа се определят антитела срещу HIV-1 и HIV-2, търсене на антитела от клас G, което обикновено се появява на по-късна дата, и антитела от клас A и M, те могат да бъдат открити в ранните етапи (по време на инкубационния период).

    При получаване на положителни проби следва следното:

    • ако първият тест е положителен, тогава кръвта се проверява повторно от друг лаборант;
    • повтарящият се положителен резултат предполага повторно усвояване на материала,
    • когато резултатът се повтаря, на пациента се назначава имуноблотинг.

    Окончателното заключение за наличието на ХИВ инфекция се издава само след резултата от имуноблотинг.

    ELISA се използва и като диагностично изследване на туберкулозата, но дори ако пациентът дори е имал антитела срещу тази патология, това не винаги потвърждава наличието на туберкулоза, поради което ELISA често се използва като техника за изясняване или за диагностика на латентна извънбелодробна форма.

    ELISA анализът е такова проучване, което ви позволява да откриете инфекция с паразити и протозои при пациент, по време на диагнозата можете дори да определите времето на инфекцията.

    ХламидияЦитомегаловирусПаразити
    IgM - откриваем 7 дни след инфекцията,IgM се откриват 30-45 дни след инфекцията или по време на реактивиране на инфекцията в рамките на 4-6 месецаПо време на проучването се определя IgME.

    IgG - хроничен стадий на инвазия

    IgA - инфекцията е възникнала преди повече от 30 дни
    IgG - инвазията е в острата фаза
    IgG - потвърждава диагнозата и показва ефективността на терапията

    Плюсове и минуси на анализа

    ELISA има много предимства, което обяснява популярността му сред лекарите и пациентите, това са:

    • висока точност на резултата,
    • достъпна цена,
    • бърз резултат,
    • идентифициране на стадия на заболяването,
    • контрол на болестта във времето.

    Наред с предимствата обаче има и недостатък - в редки случаи анализът е фалшиво положителен или фалшиво отрицателен..

    Защо резултатът може да е ненадежден

    В резултат на това могат да възникнат грешки поради технически нарушения, тъй като анализът е ненадежден при хора с определени хронични заболявания (ревматоиден фактор), които се характеризират с производството на специфични антитела.

    Също така, крайният резултат се влияе от употребата на лекарства от пациенти и метаболитни нарушения. Поради тези причини положителен резултат за ХИВ и ракова патология изисква многократно вземане на проби.

    Разходи за изследвания

    Цената на ELISA варира в зависимост от посоката на диагнозата (рубли):

    • хепатит 250 -900;
    • вируси - 250-1000;
    • ХИВ - 250-350;
    • хелминтски инвазии - 280 - 900;
    • сифилис -150-250;
    • гъбични инфекции 400-500.

    Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ е един от най-ефективните методи за изследване на различни вирусни патологии, паразитни инфекции и онкологични патологии. Изследване като ELISA значително улеснява диагнозата, но този анализ не трябва да се тълкува от пациента самостоятелно, а само лекар трябва да участва в декодирането..

    Автор на статията: Bacio

    Дизайн на статията: Олег Лозински