Какво представлява кръвен тест за ELISA

Развитието на съвременната медицина в света на диагностиката не спира да удивлява с постиженията си и сега лекарят няма нужда да прави предположения относно вероятната диагноза, разчитайки само на косвени признаци. Създаването и въвеждането в света на лабораторни изследвания на ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) ви позволява бързо и точно да определите не само присъствието на патогена, но и много други характеристики на заболяването.

История на създаването и развитието на IFA

Този метод за изследване на кръвта започва да се използва в практическата медицина още в средата на миналия век - някъде през 60-те години. Първоначалната му цел беше научно изследване в областта на хистологията, което беше ограничено до търсенето и изследването на клетъчната антигенна структура на биологичните видове. Кръвният тест чрез ELISA се основава на взаимодействието на сродни антигени (AG) и специфични антитела (AT), с образуването на комплекс "антиген-антитяло", определен от ензима.

Това явление накара учените да решат, че методът може да се използва за разпознаване на протеинови съединения от различни класове, образувани в кръвен серум, когато патогенът попадне в тялото. Поради прякото им участие във функционирането на имунната система, тези съединения се наричат ​​имуноглобулини (Ig, Ig) и откритието е най-големият пробив в лабораторната диагностика..

В същото време този силно чувствителен метод започва активно да се използва едва през 80-те години и е достъпен само във високоспециализирани лечебни заведения. Първите успяха да използват ензимни анализатори на имуноанализи в станции и центрове за кръвопреливане, венерически и инфекциозни медицински институции. Това се дължи на бързото разпространение на „чумата на 20-ти век” - СПИН и се наложи спешни диагностични и терапевтични мерки..

Възможности на техниката

Областта на приложение на кръвния тест за ELISA е доста широка - в момента е невъзможно да си представим колко сложно би било търсенето на причината за много заболявания. Подобни изследвания сега се използват в почти всички медицински области, дори в онкологията. Въпреки че е невъзможно за неинформираните да разберат, в някои случаи, след като са го извършили, е било възможно да спасят живота на пациентите, като са открили тумор в ранните етапи..

В съвременните диагностични центрове лабораторните изследвания са представени не само от туморни маркери - те са оборудвани с впечатляващ арсенал от панели за провеждане на тази диагноза. С тяхна помощ е възможно да се определят много патологични състояния, като хормонални аномалии и инфекциозни процеси от различен произход..

В допълнение, провеждането и декодирането на кръвен тест ELISA ще направи възможно проследяването на ефекта на лекарствата върху тялото на болен човек и дори животно. Последният се използва широко във ветеринарните клиники, като спомага за поддържането на здравето на нашите домашни любимци или хранители, като осигурява стабилни доставки на незаменими в диетата месо, млечни продукти и яйца..

Така че, в резултат на приемането на само няколко милилитра венозна кръв и нейната диагноза по метода ELISA, лекарят, след като е описал материалите за изследване, ще може да определи:

  • хормонално състояние, включително биологично активни вещества на половите жлези и щитовидната жлеза, както и надбъбречните жлези;
  • наличието на бактериални и вирусни инфекции (хепатит В и С, сифилис, херпес, хламидия, туберкулоза, мико- и уреаплазмоза, ХИВ, TORCH) и други заболявания от този характер;
  • признаци на жизнена активност на патогени на патологичния процес, завършил с възстановяване и преминал в стадия на образуване на антитела (имунен отговор).

Такива комплекси са много по-лесни за разпознаване и елиминиране от имунните клетки. Остатъчните ефекти под формата на антитела в множество случаи се съдържат в кръвта за цял живот, което практически намалява риска от повторна инфекция до нула.

Разновидности на имуноглобулини

Има няколко вида антитела и всяко от тях участва в процеса на имунния отговор на определен етап. Например, имуноглобулините от клас М (IgM) са първите, които се образуват в отговор на навлизането на хипертонията в тялото. Най-високите им нива се наблюдават през първите дни на заболяването..

Тогава имунната система пуска в плазмата клас G Ig (IgG), които са отговорни за пълното унищожаване на антигените и възстановяването на пациента. По-късно те продължават да бъдат в кръвта, като по този начин подготвят имунитета за многократното попадение на идентичния патоген. Ето как работи ваксинацията. С въвеждането на отслабени антигени на патологични микроорганизми, много имуноглобулини се появяват и остават циркулиращи в плазмата.

И впоследствие, ако възникне патогенен контакт, те бързо се справят с инфекцията, спасявайки тялото от заплахи за здравето. IgA се концентрира в големи количества в лигавиците, блокирайки навлизането на патогенни вируси и бактерии в тялото. IgE са отговорни за убиването на паразитни инфекции и има много други имуноглобулини, участващи в имунния отговор.

Основните обекти, представляващи интерес за лабораторна диагностика, са Ig класове M, G и A. По нивото на тяхната концентрация можете да определите стадия на заболяването и да разберете от какви инфекциозни заболявания е страдал човек през живота си. Например можете да проверите дали в миналото е имало варицела или рубеола. Лекарят, за да разбере дали определен тип AT или AH присъства в тялото на пациента или концентрацията на който и да е хормон, не е необходимо да предписва множество лабораторни изследвания - достатъчно е да напише направление за ELISA.

Същността на техниката

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ за паразити и други микроорганизми - вредители по здравето на организма дава възможност не само да се установи наличието на патогени, но и да се каже за техния брой в кръвната плазма на пациента. По този начин такова проучване позволява както качествен, така и количествен анализ на патогенни микроорганизми, открити в серума..

Нивото на концентрация на патогена значително влияе върху развитието на инфекцията и скоростта на възстановяване, поради което качествената оценка се счита за не по-малко важна от количествената. На нея се дава далеч не последната роля както в лечението на деца, така и на възрастни. Но как е възможно ELISA да разпознае толкова широк спектър от микроорганизми, които паразитират в тялото на хората и животните, причинявайки вреда и намалявайки качеството на живот??

Методологията на изследването се основава на няколко варианта (преки и косвени - състезателни и неконкурентни) за изпълнение на възложените задачи, всеки от които е предназначен за конкретни цели. Този подход позволява целенасочено търсене и в най-кратки срокове да се установи причината за определена патология. За откриване на Ig от различни категории клас се използва плоча с 96 ямки (полистиролов панел) и в ямките му са разположени сорбирани рекомбинантни протеини. Те играят ролята на антигени и в началния етап са в твърда фаза.

Когато попадне в кладенеца с кръвна плазма, антигените или антителата идентифицират обекта във връзка с тяхната ориентация и образуват комплекс (AG - AT). Тази формация се фиксира от ензимно съединение (конюгат), което впоследствие ще се прояви като променено оцветяване на кладенчето. ELISA се произвежда върху специфични тестови системи, произведени в специализирани лаборатории и оборудвани с пълен набор от реактиви.

Този анализ може да се извърши върху шайби - шайби и отчитане на спектрофотометър, но те изискват ръчен труд. Разбира се, няколко пъти е по-удобно и по-бързо лабораторен асистент да извършва всички манипулации на напълно автоматизирани устройства. При използването им лабораторният персонал се освобождава от голямо количество монотонна дейност - измиване, накапване и останалата част от рутината, но не всички лечебни заведения могат да си позволят толкова скъпо оборудване

Тълкуването на изследователски материали е изключително компетентност на специалист по лабораторна диагностика - само на него могат да се разкажат резултатите за спецификата и тънкостите в хода на заболяването. В този случай лекарят трябва да вземе предвид възможността за получаване на фалшиво отрицателни или фалшиво положителни отговори..

Декодиране на материали

Резултатът от висококачествен ензимен имуноанализ трябва да бъде недвусмислено заключение дали в тази кръвна проба е открит желаният микроорганизъм или не. Количественият анализ ще покаже нивото на концентрация и може да бъде изразен по два начина - чрез стойност в цифри или чрез броя на знаците "+".

Анализирани показатели

По време на изследването се извършва внимателно проучване на основните имуноглобулини, участващи в имунния отговор, като например:

  • IgM - откриването на този клас означава развитие на остра форма на инфекциозно заболяване. Отрицателният резултат от търсенето на IgM може да бъде както доказателство за отсъствието на желания патоген, така и за прехода на болестта в хроничен ход.
  • IgA - определянето на този клас при липса на IgM в повечето случаи е сигнал за хронична или латентна форма на развитие на инфекциозно заболяване.
  • IgM и IgA (едновременно присъствие) - положителни резултати и за двата типа показва самия връх на острата форма на патология.
  • IgG - неговото присъствие показва трансформация на болестта в хронична форма или възстановяване и формиране на имунитет към определящия агент.

Появата и натрупването на определен клас IS се случва на различни времеви етапи. Така например, IgM се появява първи, около 5 дни след като патогенът удари. IG остават в кръвта за около 5-6 седмици и след това постепенно изчезват. Понастоящем те са достъпни за определяне чрез ELISA. Около 3-4 седмици след началото на заболяването се появява IgG, който впоследствие може да остане няколко месеца. Но при анализа те не винаги се намират.

IgA се образуват в кръвта в периода 2-4 седмици, докато 20% от тях се съдържат в серума, а 80% в секрецията на лигавиците. По правило тези имуноглобулини изчезват в рамките на 2-9 седмици, което показва унищожаването на патогена и възстановяването на пациента. Ако ELISA все още показва наличието на IgA, това сигнализира за прехода на процеса в хронична форма..

Опции за резултатите от анализа

В зависимост от получените данни отговорите на ELISA могат да бъдат издадени на формуляр под формата на таблица с пълен списък на всички AT и AG и индикация за положителна или отрицателна реакция. В определени ситуации ще се покаже количествена стойност - рязко положителен, положителен, слабо положителен или отрицателен резултат. Вторият вариант показва количеството антитела, съдържащи се в изследваната кръвна проба.

В допълнение към горните стойности в процеса на ELISA се изследва и друг количествен параметър - индексът на авидност AT, изчислен като процент. Той показва колко дълго продължава болестта - тоест колкото по-висок е показателят, толкова повече време се развива патологията.

Алтернативен метод ELISA

Ензимният имуноанализ е доста известна и често срещана диагноза. Може би някои никога не са чували за него, но има друга версия на това проучване, която е още по-малко известна на широк кръг хора, при която се взема проба от некръв. Тази техника се нарича анализ на изпражненията за окултна кръв и в много случаи ви позволява да избегнете допълнителни изтощителни процедури, които също са придружени от неприятни усещания..

ELISA тест за окултна кръв (молекули на хемоглобина) дава възможност да се открие кървене от храносмилателната система, дори незначително, признаците на което в изпражненията на пациента, както се казва, не могат да бъдат открити с невъоръжено око. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ при човешки изпражнения за кратко време може да покаже пептична язва, полипоза, дивертикулоза, тумори, които не са придружени от определени симптоми в ранните етапи.

Към днешна дата са създадени хиляди разновидности на системи за тестване на ензимни имуноанализи, които дават възможност за намиране на AT и AG на огромен списък от патологии. Следователно този анализ се използва в почти всички клонове на медицината за всяка възрастова категория. И абсолютната безвредност ви позволява да прибягвате до нея както по време на бременност, така и за диагностика на изтощени пациенти.

ELISA анализ: какво е това? защо е необходимо? плюсове и минуси на метода

ELISA анализ - какво е това? Пълното име на този диагностичен метод се нарича ензимно-свързан имуносорбентен анализ и се основава на определянето в периферната кръв на антитела от различни класове или имуноглобулини, които се произвеждат от човешкото тяло..

В практиката на лекар, ELISA анализът заема много важно място, когато е необходимо да се диагностицира всяка инфекциозна патология. Този анализ показва не само наличието на инфекциозно заболяване, но и етапа на патологичния процес. Също така, не само по отношение на патогена, методът ELISA е показан за употреба: той се използва за диагностициране на алергични състояния. Този тест ви позволява да идентифицирате проблеми в имунната система, при много заболявания на хемопоетичната система, автоимунни и други нарушения.

Защо е необходима IFA?

Всички изследователи са склонни да вярват, че името "антитяло" е твърде жалко. И все пак, тя отразява една важна характеристика на имуноглобулините: те са способни да свързват и неутрализират вредните вещества, като ги приближават като „ключ“ към „ключалка“. Количеството антитела в кръвта отразява не само общата способност на организма да се защитава срещу инфекции, но и способността да образува циркулиращи имунни комплекси, които могат да се появят при различни автоимунни заболявания, например при ревматоиден артрит или анкилозиращ спондилит..

Комплекси от антитела с антиген (вреден фактор с инфекциозен характер) са резултат от реакцията на организма към въвеждането на "външни лица". Следователно имунната система се научава да ги разпознава, с помощта на лимфоцити, тя обучава имунокомпетентни клетки и те са в състояние да произвеждат силно специфични антитела. И така, антителата към вируса на Епщайн са подредени по различен начин, отколкото антителата към вирусен хепатит С или към Е. coli и анти-HAV, или антитела към вируса на хепатит А - по различен начин от автоантителата към хрущялната тъкан. Именно високата специфичност и съответствието на имуноглобулините с инфекциозен агент прави висока стойност за такива лабораторни изследвания като ензимен имуноанализ.

След силна връзка на антитела и антигени в един комплекс (антиген-антитяло), вредните фактори губят способността си да увреждат тъканите на тялото, а след това тези комплекси или се неутрализират или лизират от фагоцитоза от неутрофили и, „усвоявайки се“, напускат тялото.

Кръвният тест с ELISA може да покаже с какъв специфичен патогенен фактор е изправено нашето тяло, на какъв етап е процесът на взаимодействие между тялото и инфекцията. След проучването лекарят може да направи прогноза с висока степен на увереност, да предпише определени видове лечение и в някои случаи дори да определи продължителността на живота на пациента, особено при хронични вирусни инфекции, например при вирусен хепатит С.

Но в някои случаи в организма изобщо няма инфекциозни агенти и антителата „по погрешка“ атакуват собствените им органи и тъкани, тъй като имунокомпетентните клетки получават фалшива информация. Такива заболявания се наричат ​​автоимунни, а ензимният имуноанализ също помага да се разпознае тази хронична патология и да помогне в диагностиката.

Повече за имуноглобулините

Общо човешкото тяло произвежда 5 известни класа антитела, които са обозначени като Ig (което означава имуноглобулини), които принадлежат към класове A, M, G, E и D. Всички те са от голямо значение при интерпретирането на резултатите от ELISA анализ. Разбира се, има много повече комплекси и не всички от тях все още са отворени. Но при диагностицирането на различни заболявания първите три вида антитела са най-ценни. Кръвният тест за ELISA използва възможно най-много информация: моментът на поява на антитела в кръвта, промяната в тяхната концентрация в зависимост от времето, периода на изчезване, както и вида на специфичните антитела.

И така, участниците в първичния, остър инфекциозен процес са имуноглобулини от клас М, които винаги показват остра фаза, дори ако болестта е клинично изтрита. Типичен пример е аниктеричната форма на остър вирусен хепатит В или С. Ензимно-свързан имуносорбентен тест за хепатит ще покаже, че човек има остър хепатит и симптоми като болка в хипохондриума, сухота в устата, болки в ставите и други неспецифични симптоми стават лесно разбираеми.

Няколко седмици по-късно тези антитела се откриват във все по-изчезваща концентрация, отстъпвайки на имуноглобулините от клас G. Те се определят в кръвта в продължение на много месеци и дори години и показват или възстановяване, и след това те могат да останат за цял живот, образувайки силна имунна система. Това показва мощна защита срещу патогенни антигени. И така, именно антителата от този клас правят човека имунизиран срещу повтарящи се случаи на антракс и чума. Но има моменти, когато тези антитела не предотвратяват вредното им въздействие в присъствието на антигени. В този случай можем да говорим за увеличаване на активността на хроничен процес..

Що се отнася до IgE, той има приложение при диагностицирането на различни паразитни инвазии и алергични състояния, а IgD изпълнява спомагателна функция: ензимно-свързаният имуносорбентен анализ позволява използването му в сложната диагностика на бронхиална астма и автоимунни състояния. Разбира се, дешифрирането на ELISA анализа е много по-сложно и специалистите - имунолозите могат да разкажат много повече. Какви са индикациите, че пациентът може самостоятелно да кандидатства в лабораторията за извършване на изследвания?

Показания за анализ

На първо място, трябва да разберете, че няма такъв анализ - „просто кръв за ELISA“. Има анализ за хепатит, случва се - за уреаплазма или за сифилис. По този начин, даряването на кръв за ELISA може да бъде насочено само чрез "нареждане" за търсене на желаната инфекция. Просто е толкова неразбираемо защо да дарявате кръв от вена, без да знаете какво да търсите. Ето защо ензимният имуноанализ е мощен инструмент, който е важен при диагностичното търсене. Само лекар може да предпише този анализ, тъй като той целенасочено търси инфекция, която се характеризира с тези симптоми. Обикновеният човек, разбира се, може да поръча 150 кръвни теста чрез ELISA за „всички инфекции“, но това би било неразумен и скъп подход към диагностиката, вземайки тестове за всичко.

Най-търсеното назначаване на тези тестове за следните заболявания и състояния:

Различни микробни и вирусни инфекции, симптоми на инфекциозни заболявания - обрив, треска, жълтеница, подути лимфни възли, синдром на диария, съмнения за полово предавани болести.

Техниката ELISA помага при определянето на уреаплазма и микоплазма, сифилис и хламидия, туберкулоза и цитомегаловирусна инфекция, херпес, вирусен хепатит и вирус Epstein-Barr. Понастоящем около 500 различни инфекции могат да бъдат проверени с помощта на ензимен имуноанализ.,

Ако подозирате хелминтска инвазия и наличие на симптоми като алергии, еозинофилия в кръвта, сърбеж, диспепсия и загуба на тегло,

Прочетете повече за този тип изследвания в статията "Кръвен тест за глисти и паразити: методи за изследване, ELISA, на кого и как да дарявате?".

Когато се идентифицират алергени, които причиняват оток на Квинке, уртикария, задух и пристъпи на астма.

В този случай се откриват специфични Ig E и има цели алергични панели, които ще помогнат за точното определяне на алергена - калмари или скариди, суха храна за риби, съдържащи дафния, домашен прах. При полиноза този метод ви позволява да намерите точно зърнените култури, храсти или дървета, които причиняват пролетно кихане и сълзящи очи,

  • Този метод е показан при съмнение за автоимунни заболявания, които се лекуват от ревматолози,
  • Ако се подозира растеж и активност на тумора,
  • В комплексната диагностика на имунодефицитни състояния и ХИВ - инфекция,
  • За кръвни заболявания и при трансплантация, за цялостна оценка на имунитета, например преди чернодробна или бъбречна трансплантация.

Сега знаем защо трябва да дарите кръв за ELISA. Разберете как се провежда това проучване.

Как се прави анализът?

Класическият материал е венозната кръв на пациента. Но ако е необходимо, можете да изследвате голямо разнообразие от течности и тъкани: слуз, слюнка, цервикален секрет, цереброспинална течност, стъкловидно тяло на окото, съдържанието на пъпната връв и околоплодната течност. Важно е да запомните, че приемането на различни лекарства, прекомерната физическа активност, злоупотребата с алкохол могат силно да изкривят резултатите от теста..

Има няколко метода, които позволяват този анализ. Най-често използваният метод в клиничните лаборатории е фотометричният метод. В този случай се използват вещества, маркирани с боя, след реакцията на които и маркирането на комплекса антиген-антитяло, цветът им се променя. В резултат на това оптичната плътност на разтвора също се променя и тази промяна е право пропорционална на концентрацията на откритите антитела. За измерване на тези отклонения успешно се използват лабораторни спектрофотометри.

Също така, за ELISA се използва флуорометричен метод, който се основава на флуоресценция. И тук се изчислява интензивността на флуоресцентни вещества, които са се утаили върху изследваните проби..

И накрая, имунологичният анализ използва електрохимични методи за определяне на активността на ензимите, които са специфични етикети за антигени и антитела. Самият ензимен имуноанализ най-често включва използването на ензими като алкална фосфатаза, пероксидаза от хрян и галактозидаза. Тези ензими са способни да се свързват с антитела или антигени и да ги маркират поради тяхната активност.

Недостатъци на метода и неговите плюсове

Очевидните "плюсове" включват демократичната цена на анализа, възможността за скрининговото му използване при големи групи от населението, например при изследване на бременни жени за ХИВ. Методът на ензимен имуноанализ е доста специфичен и може да се използва за контрол на качеството на лечение на много заболявания. Важно е анализът да се подготви бързо и да е прост и безопасен за пациента..

Има обаче много клопки. Така че, ако имуноглобулините не бъдат открити, това не означава 100% отсъствие на болестта. Наистина, на фона на имунодефицита, тялото просто може да не „има сили“ да синтезира антитела. Ако пациентът има тежка чернодробна недостатъчност, тогава черният дроб просто не е в състояние да синтезира протеин - градивен елемент за антитела. В този случай резултатът се нарича серонегативен и потвърждаването на инфекцията се изисква чрез директен и най-усъвършенстван изследователски метод - PCR, или полимеразна верижна реакция. За разлика от ензимно-свързания имуносорбентен анализ, този метод не разкрива реакцията на организма към инфекциозния процес (който може да е дефектен или да липсва изобщо), при PCR наследственият материал се определя директно или се локализира самият патоген.

Методът на ензимен имуноанализ може да даде грешка на фона на много хронични заболявания, на фона на имуносупресивна терапия. В хелминтологията и паразитологията има закон: само откриването на паразит или неговите яйца е абсолютно надежден начин за поставяне на диагноза. ELISA може да осигури кръстосани и фалшиво положителни методи, отговарящи на много нормални събития в живота на пациента.

В заключение трябва да се каже, че ензимно-свързаният имуносорбентен анализ е мощен, но спомагателен начин за лабораторна диагностика на много заболявания. Но във всеки случай диагнозата трябва да се основава на много фактори: оплаквания и анамнеза на пациента, данни от прегледа, други спомагателни и инструментални диагностични методи.

Какво представлява ELISA кръвен тест и защо е важен за диагностиката

Какво представлява ELISA кръвен тест

Това е лабораторно проучване, което ви позволява да определите наличието на специфични антитела (защитни фактори на кръвта от протеинова природа) към определени антигени (причинители на заболявания). Сред антителата имуноглобулините са от първостепенно значение, които могат да съществуват под формата на имунокомплекси.

Имуноглобулините се произвеждат в резултат на сложни неврохуморални реакции на човешкия имунитет, възникващи като отговор на въвеждането на чужди антигени. За всеки вид патогенен агент се произвеждат свои специфични антитела. Те действат чрез "свързване" на антиген или патологичен микроорганизъм, образувайки сложно съединение "антиген-антитяло" с последваща неутрализация, ензимен лизис, реакции на фагоцитоза и екскреция от тялото.

Моля, обърнете внимание: именно чрез наличието на определени комплекси по метода ELISA се определя вида на патогена или вредното вещество на пациента.

Можете да разберете основните принципи на функционирането на човешкия имунитет, като гледате това видео ревю:

Имуноанализ от тип сандвич

Фигура: 2. Схематично представяне на имуноанализ от тип сандвич. ATp - опорно антитяло, ATd - детекторно антитяло, AG - антиген, M - етикет, ковалентно свързан с детекторното антитяло, P - субстрат, върху който се сорбира опорното антитяло.

Този вариант на имуноанализ (фиг. 2) използва двойка антитела, специфични за пространствено отдалечени епитопи на изследвания антиген.

I. Поддръжка на сорбция на антитела

В ямките на 96-ямкова плака за имуноанализ, субстратните антитела се адсорбират 1-2 μg на гнездо в 100 μl фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS). Инкубацията се извършва в продължение на 30 минути при стайна температура и се разклаща на хоризонтален шейкър за плочи. Измиването (2 пъти) на несвързани антигенни молекули се извършва с фосфатно-физиологичен разтвор, съдържащ 0,1% Tween-20 (PBST).

II. Блокиране

За да се блокират местата на неспецифично свързване, ямките на плочата се пълнят с PBST и се инкубират за 10-15 минути при стайна температура.

III. Антигенна инкубация

В ямките на плаката с предварително адсорбирани антитела се добавят 50 μl от тествания разтвор или стандартни разреждания на антигена. Разрежданията на антигена трябва да се приготвят с PBST, тъй като Tween-20 намалява неспецифичното свързване на протеиновите молекули една с друга и с повърхността на плочата. Както тестовият разтвор, така и стандартните разреждания на антигена се прилагат по двойки (или в 3 повторения), като се използват две (три) ямки за всяко разреждане на протеини. Инкубацията се провежда при стайна температура в продължение на 30 минути при постоянно разбъркване. Измиването се извършва с разтвор на PBST 3 пъти.

IV. Инкубация с ензимно-свързани антитела

В ямките на плаката добавете 100 μl разтвор на специфични антитела, конюгирани с ензимен етикет. Оптималната концентрация на конюгирани антитела обикновено се посочва от производителя (обикновено се използва концентрация от 2-4 μg / ml). Инкубацията с белязани с ензими антитела се извършва в продължение на 30 минути при стайна температура и се разклаща на хоризонтална клатачка. Измиването се извършва с PBST 5-6 пъти.

V. Провеждане на ензимна реакция, придружена от появата на оцветен продукт

Добавете 100 μl субстратен разтвор към ямките и инкубирайте 10 минути при стайна температура и постоянно разбъркване.

Vi. Спиране на ензимна реакция

Преди да се измери оптичната плътност, цветната реакция се спира с 0,5 M H2SO4. След инкубация, 50 μl от 0,5 M разтвор на сярна киселина се добавят към ямките с работния разтвор на OPD. След това можете веднага да започнете да измервате оптичната плътност.

Vii. Измерване на оптичната плътност

Оптичната плътност на разтвора на оцветения продукт се измерва при λ = 490 nm с помощта на плоча спектрофотометър.

версия за печат

Какво представляват имуноглобулините

Открити и проучени са 5 основни класа имуноглобулини - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ролята на останалите все още не е напълно изяснена и е на етапа на научните изследвания.

Моля, обърнете внимание: най-важните в практическата медицина са имуноглобулините от класове - A, M и G. Информативната стойност на дефиницията се основава на различни интервали от време на тяхното появяване, максимум и изчезване.

Нека разгледаме този въпрос по-подробно..

Основната задача на имуноглобулин А (IgA) е защитните функции на лигавиците на дихателните пътища, стомашно-чревния тракт и пикочната система. С остро начало на заболяването е невъзможно да се идентифицират. Тези защитни комплекси се появяват само от 2 седмици от началото на заболяването, понякога по-късно. По-голямата част от имуноглобулин А се концентрира в лигавичните тъкани. Приблизително 80%. Останалите антитела циркулират в кръвта. Основната функция е да неутрализира и унищожи микроорганизмите. След като острите прояви на болестта отшумят, количеството на тези имуноглобулини започва да намалява и напълно изчезва до 8 седмици след началото на заболяването. Ако IgA бъде открит на по-късна дата, това показва хронизиране на процеса.

Основните и първите маркери на острата фаза на развиващата се патология са клас М имуноглобулини (IgM). Откриват се до 5-ия ден от началото на неразположението. Присъствието им в кръвта може да се определи за около 6 седмици. Тогава те започват бързо да избледняват.

Остатъчният имунен отговор се характеризира с наличието на имуноглобулини от клас G (IgG) в кръвта. Появата на тези фактори в кръвта се открива около месец след началото на заболяването. В бъдеще те могат да бъдат определени в продължение на много месеци, години и дори цял живот, като изпълняват защитна функция срещу връщането (рецидив) на болестта и в някои случаи правят невъзможно вторичното развитие на патологията. Ако количеството имуноглобулин G започне да нараства отново, тогава може да се подозира повторна инфекция. Подобно заключение може да се направи чрез провеждане на два до три теста, направени с интервал от 2 седмици..

Имуноглобулин Е (IgE) се използва в практиката на паразитологията.

Имуноглобулин D (IgD) се намира върху В-лимфоцитите и се намира в ниски концентрации при здрави хора. След 10 години живот той достига своите максимални стойности. Количеството на имуноглобулин D се увеличава по време на бременност, при пациенти със системни заболявания на съединителната тъкан, бронхиална астма, заболявания, причинени от имунодефицитно състояние.

Противопоказания

Не са установени кардинални противопоказания за ензимен имуноанализ. Понякога по време на бременност, когато пациентът има непрекъсната промяна в хормоните в кръвта, може да се наложи анализът да се извърши няколко пъти за по-надежден резултат. Диагностичният метод не се препоръчва да се използва след:

  • хирургични интервенции;
  • хемолиза (унищожаване на червените кръвни клетки);
  • кръвопреливане;
  • вземане на пункция или биопсия на биологичен материал.

Показания за назначаване на ензимен имуноанализ

Определяне на антитела срещу наличието в организма на патогенни микроби, които причиняват:

  • сифилис;
  • трихомониаза;
  • уреаплазмоза и микоплазмоза.

Нараства количеството на имуноглобулините и при хелминтни инвазии.

Провежда се диагностика за откриване:

  • херпесни заболявания;
  • групи вирусен хепатит;
  • Вирус на Epstein-Barr;
  • цитомегаловирус.

С помощта на ELISA е възможно да се определи наличието на антитела към 600 вида алергени, да се открие състоянието на имунодефицит, да се извърши цялостен преглед преди операцията по трансплантация, да се направи цялостен анализ за ефективността на лечението.

ELISA е допълнителен метод за откриване на ракови клетки.

Обучение

Принципът на този тип кръвен тест се основава на образуването на специфични антитела в човешкото тяло, когато антигени навлизат в него, тоест чужди агенти, които причиняват развитието на определено заболяване. В резултат на тяхното взаимодействие се образуват комплекси "антиген - антитяло", които се подлагат на изследвания при изпълнението на ензимен имуноанализ.

В тази връзка, за да не се повлияят тези комплекси и съответно надеждността на получените резултати, анализът на кръвта и други биологични материали за ELISA изисква известна подготовка..

Кръв се дарява на празен стомах, също 14 дни преди планираното изследване, специфичното лечение се преустановява и употребата на антибактериални, антивирусни лекарства се спира.

Кръв за ELISA се дава от вена. Непосредствено преди вземането на кръвни проби трябва да се ограничи физическата активност, както и да се избягва пушенето и пиенето на алкохолни напитки.

Как се извършва кръвна ELISA?


За ензимен имуноанализ в повечето случаи се използва кръвта на пациентите, понякога се взема тъкан на стъкловидното тяло, течност на гръбначния канал, околоплодна течност.

Кръвта се взима чрез инжекционна игла в спринцовка от кубиталната вена. Изследването се извършва на гладно. Трябва да се помни, че приемането на някои лекарства може да повлияе на резултата от теста. Преди да дарите кръв, трябва да се въздържате от пушене, пиене на алкохол. Употребата на наркотици може да изкриви резултатите.

В случай на отрицателни стойности на имуноглобулини IgM, IgG, IgA, можем да говорим за отсъствие на заболяването или неговата начална фаза, а резултатът с минуси е възможен при пълно възстановяване след значително количество време.

Ако IgA и IgM не бъдат открити и IgG се проявява положително, тогава най-вероятно говорим за формирания имунитет след инфекциозно заболяване или след ваксинация.


В случай на висок титър на IgM с отрицателни стойности на IgG, IgA, може да се заключи, че има остро инфекциозно заболяване.

Едновременните положителни стойности на резултатите от имуноглобулини - IgA, IgM, IgG са характерни за острата фаза на рецидив на съществуващото хронично заболяване.

За хронична инфекция във фазата на затихване на процеса (ремисия), ELISA показва отрицателни стойности на имуноглобулин М (IgM), докато резултатът от имуноглобулини G (IgG) и A (IgA) ще бъде положителен.

Комплекти реактиви

Комплекти за ензимен имуноанализ се произвеждат от различни производители в различни конфигурации. Признат е в Русия. Този производител произвежда комплекти реактиви за изследване чрез ELISA на почти всички инфекции, често срещани по нашите географски ширини, които могат да бъдат анализирани по този начин. В допълнение към самите реактиви, комплектите включват допълнителни материали, които осигуряват безопасност, удобство и скорост на анализ. Освен това химичните вещества са оцветени в различни цветове, което намалява вероятността от грешки при избора на реагент от лаборант..

Химическите и биологичните комплекти се различават по относителна наличност, което пряко влияе върху разпределението и наличността на ензимен имуноанализ за населението.

Предимства на метода на ензимен имуноанализ

Основните предимства на метода ELISA са:

  • ниска цена на анализа;
  • диагностична специфичност, точност;
  • динамичен контрол (повторен анализ за определяне на ефективността на лечението и етапите на заболяването);
  • възможността за провеждане на масови изследвания в огнищата на инфекция;
  • скоростта на получаване на резултата;
  • относителна лекота на анализ;
  • възможността за използване на информационни технологии при обработката;
  • безопасност и безболезненост за пациента.

Когато назначи

Методът ELISA се счита за един от най-точните диагностични методи, неговата надеждност е повече от 90%. Анализът се използва за идентифициране на различни сериозни заболявания и опасни състояния..

Какви патологии могат да бъдат идентифицирани:

  • вирусен хепатит;
  • ХИВ;
  • цитомегаловирусна инфекция;
  • херпесна патология;
  • мононуклеоза;
  • токсоплазмоза;
  • рубеола, морбили;
  • някои видове паразитози;
  • патологии, причинени от Helicobacter pylori;
  • онкологични заболявания;
  • алергични реакции;
  • хормонални нарушения;
  • проблеми в работата на репродуктивната система;
  • автоимунни патологии;
  • нарушения на развитието, деформации на плода.

Ензимно-свързан имуносорбентен тест по време на бременност ви позволява да оцените риска от развитие на определени патологии на бъбреците, сърцето, кръвоносните съдове.

Диагнозата се прави, за да се следи нивото на антителата, които могат да причинят сериозни неврологични нарушения при дете.

Имуноанализ на кръвен тест в паразитологията


Възможността за използване на ELISA в диагностиката на паразитни заболявания се определя от специфичния имуноглобулин Е (IgE), който има тенденция да се увеличава при тази група заболявания. В допълнение, имуноглобулин Е е маркер на атопични реакции, свързани с алергични процеси. В кръвта се намира в малки количества. Основната му локализация са лигавиците, базофилите и маркофагите. Основната функция на този протеинов комплекс е да защитава лигавиците на тялото. Но в същото време той е участник в имунните реакции, насочени срещу паразити. Еозинофилите и макрофагите „управляват“ IgE активирането. Това е важен факт при сравняването на данните от анализа при установяване на диагнозата на заболяването..

ELISA се използва за откриване на:

  • кръгли хелминти (аскариди, острици);
  • остри и хронични форми на описторхоза;
  • трихинелоза;
  • наличието на ламблии (като допълнителен анализ);
  • форми на лайшманиоза;
  • амебиаза;
  • съдържание на токсоплазма;

Важно: имуноглобулините се произвеждат в организма като антитела към определени антигени. Следователно, дори и с най-голяма специфичност на анализа, грешките в точността не са изключени. При паразитни заболявания процентът на вероятността е около 90%.

В заключение трябва да се отбележи, че съвременната имунология непрекъснато се развива, търсейки нови методи за диагностика и лечение на заболявания..

Степаненко Владимир, хирург

67 общо днес

(54 гласа, средно: 4,17 от 5)

Подобни публикации
Липиден кръвен тест
Кръвен тест за креатинин: норми, декодиране, как да даря

Малко за защитната роля на протеините в човешкото тяло

След инфекцията човешките антитела променят концентрацията си в кръвта в зависимост от стадия на заболяването. Именно изследвания на количеството и качеството на антителата помагат да се определи дали тази фаза е остра или хронична и колко ефективно тялото се справя с чуждата флора..

ELISA анализът е ефективен при изследване на хормонални нарушения, определяне на рак и имунни нарушения. Той може да открие в ранните стадии такива сериозни заболявания като хепатит В и сифилис, ХИВ инфекция, както и редица вируси, които не се проявяват по никакъв начин, например цитомегаловирус.

Предимства и недостатъци

Ензимно свързаният имуносорбентен тип диагноза има редица предимства пред другите методи на изследване:

  1. Висока чувствителност (до 90%)
  2. Разумна цена на диагностичните комплекти.
  3. Стабилност при запазване на всички съставки за теста (над една година);
  4. Възможност за откриване на инфекция на първия етап.
  5. Удобство и ефективност на изследванията.
  6. Пригодност за масови проучвания.
  7. Обединение.
  8. Възможност за използване на минималното количество диагностициран материал.
  9. Лесно проследяване на динамиката на патологията с инфекциозен характер.
  10. Наличност (днес ензимен имуноанализ се извършва във всички болници и клиники)
  11. Автоматизация на реакционните етапи.

Сред недостатъците на проучването са:

  • Идентифицира не причинителя на самата болест, а имунната реакция на организма към проникването на патогена в нея.
  • Възможността за получаване на фалшиво положителен (фалшиво отрицателен) резултат поради прием на определени лекарства, технически недостатъци, нарушен метаболизъм, наличие на няколко хронични заболявания.

Възможности на техниката

Областта на приложение на кръвния тест за ELISA е доста широка - в момента е невъзможно да си представим колко сложно би било търсенето на причината за много заболявания. Подобни изследвания сега се използват в почти всички медицински области, дори в онкологията. Въпреки че е невъзможно за неинформираните да разберат, в някои случаи, след като са го извършили, е било възможно да спасят живота на пациентите, като са открили тумор в ранните етапи..

Важно! ELISA е кръвен тест, който показва маркери, характерни за някои злокачествени процеси, което ви позволява да откриете заболяване в онзи момент, когато то е извън контрола на всеки друг метод.

В съвременните диагностични центрове лабораторните изследвания са представени не само от туморни маркери - те са оборудвани с впечатляващ арсенал от панели за провеждане на тази диагноза. С тяхна помощ е възможно да се определят много патологични състояния, като хормонални аномалии и инфекциозни процеси от различен произход..

В допълнение, провеждането и декодирането на кръвен тест ELISA ще направи възможно проследяването на ефекта на лекарствата върху тялото на болен човек и дори животно. Последният се използва широко във ветеринарните клиники, като спомага за поддържането на здравето на нашите домашни любимци или хранители, като осигурява стабилни доставки на незаменими в диетата месо, млечни продукти и яйца..

Така че, в резултат на приемането на само няколко милилитра венозна кръв и нейната диагноза по метода ELISA, лекарят, след като е описал материалите за изследване, ще може да определи:

  • хормонално състояние, включително биологично активни вещества на половите жлези и щитовидната жлеза, както и надбъбречните жлези;
  • наличието на бактериални и вирусни инфекции (хепатит В и С, сифилис, херпес, хламидия, туберкулоза, мико- и уреаплазмоза, ХИВ, TORCH) и други заболявания от този характер;
  • признаци на жизнена активност на патогени на патологичния процес, завършил с възстановяване и преминал в стадия на образуване на антитела (имунен отговор).

Такива комплекси са много по-лесни за разпознаване и елиминиране от имунните клетки. Остатъчните ефекти под формата на антитела в множество случаи се съдържат в кръвта за цял живот, което практически намалява риска от повторна инфекция до нула.

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ за паразити и други микроорганизми - вредители по здравето на организма дава възможност не само да се установи наличието на патогени, но и да се каже за техния брой в кръвната плазма на пациента. По този начин такова проучване позволява както качествен, така и количествен анализ на патогенни микроорганизми, открити в серума..

Нивото на концентрация на патогена значително влияе върху развитието на инфекцията и скоростта на възстановяване, поради което качествената оценка се счита за не по-малко важна от количествената. На нея се дава далеч не последната роля както в лечението на деца, така и на възрастни. Но как е възможно ELISA да разпознае толкова широк спектър от микроорганизми, които паразитират в тялото на хората и животните, причинявайки вреда и намалявайки качеството на живот??

Методологията на изследването се основава на няколко варианта (преки и косвени - състезателни и неконкурентни) за изпълнение на възложените задачи, всеки от които е предназначен за конкретни цели. Този подход позволява целенасочено търсене и възможно най-скоро да се установи причината за определена патология..

Когато попадне в кладенеца с кръвна плазма, антигените или антителата идентифицират обекта във връзка с тяхната ориентация и образуват комплекс (AG - AT). Тази формация се фиксира от ензимно съединение (конюгат), което впоследствие ще се прояви като променено оцветяване на кладенчето. ELISA се произвежда върху специфични тестови системи, произведени в специализирани лаборатории и оборудвани с пълен набор от реактиви.

Този анализ може да се извърши върху шайби - шайби и отчитане на спектрофотометър, но те изискват ръчен труд. Разбира се, няколко пъти е по-удобно и по-бързо лабораторен асистент да извършва всички манипулации на напълно автоматизирани устройства. При използването им лабораторният персонал се освобождава от голямо количество монотонна дейност - измиване, накапване и останалата част от рутината, но не всички лечебни заведения могат да си позволят толкова скъпо оборудване

Поради това много болници и диагностични институции продължават да извършват ELISA по старомоден начин - на полуавтомати..

Тълкуването на изследователски материали е изключително компетентност на специалист по лабораторна диагностика - само на него могат да се разкажат резултатите за спецификата и тънкостите в хода на заболяването. В този случай лекарят трябва да вземе предвид възможността за получаване на фалшиво отрицателни или фалшиво положителни отговори..

Резултатите от ELISA анализ се основават на получаване на химични реакции за ензими, които служат като специални идентифициращи признаци за разпознаване на антитела. Следователно антителата започват да взаимодействат с някои антигени по време на имунохимични реакции. Всичко това дава основание да се твърди, че фалшивите резултати при даряването на кръв за ELISA са минимални..

Проучването ви позволява да определите броя на имунните клетки, техните свойства, както и наличието на необходимите антитела

Положителен резултат се счита, когато в разтвора се намери цвят. Цветът сигнализира, че антигените взаимодействат с антитялото. Ако не се случи нищо подобно, резултатът е отрицателен..

Има няколко метода и методи на ензимен имуноанализ: директен и индиректен метод, конкурентен и блокиращ метод.

В основата на изследването на кръвта (всеки друг биологичен материал) на ELISA е алгоритъм, състоящ се в изпълнението на две реакции - имунна и ензимна.

По време на първата патологичните агенти се свързват със защитните елементи на клетките на биологичния материал, взет за изследване. Образува се имунен комплекс антиген-антитяло. Изглежда така. Антигените присъстват на повърхността на абсолютно всички клетки.

ПОДРОБНОСТИ: Кръв върху транскрипт на хламидия

Когато чуждите клетки навлязат в тялото, те се улавят от имунни клетки (на чиито повърхности са разположени антитела), които сравняват данните за антигените от повърхността на новопристигналите клетки с информацията, съхранявана в собствената им „памет“. В случай на несъответствие на тези данни се включват защитните функции на тялото, което се състои в образуването на имунен комплекс.

След това се провежда ензимна реакция, която визуализира резултатите от предишната реакция. Принципът му се основава на превръщането на дадено вещество от едно в друго. За всеки тип ELISA материал, който се образува по време на имунната реакция, има определен ензим, чието третиране се използва за определяне на концентрацията на чужд агент (според интензивността на цвета на разтвора).

ELISA - ензимно-свързан имуносорбентен тест: стенограма

Публикувано от: Parazitolog в Diagnostics 16 февруари 2019 г.

Диагностичният метод (ELISA) е информативен и не е твърде скъп, поради което много лаборатории предлагат на своите клиенти този метод (ензимно-свързан имуносорбентен анализ). Изследването се извършва на празен стомах, кръв за анализ се взема от кубиталната вена на пациента. Препоръчително е да не пушите и да не пиете алкохол преди ELISA.

Какво представлява ELISA кръвен тест

Сред методите за анализ на кръвта, които позволяват да се оцени способността на организма да се противопоставя на инфекциозни заболявания и да се покаже фазата на заболяването, ензимно свързан имуносорбентен анализ (ELISA) заема важно място. Това проучване позволява цялостно да се оцени активността на защитната функция на кръвта и да се идентифицира състоянието на имунодефицит при инфекциозни патологии, както и кръвни заболявания, автоимунни процеси, хормонални проблеми.

Това е лабораторно проучване, което ви позволява да определите наличието на специфични антитела (защитни фактори на кръвта от протеинова природа) към определени антигени (причинители на заболявания). Сред антителата имуноглобулините са от първостепенно значение, които могат да съществуват под формата на имунокомплекси.

Имуноглобулините се произвеждат в резултат на сложни неврохуморални реакции на човешкия имунитет, възникващи като отговор на въвеждането на чужди антигени. За всеки вид патогенен агент се произвеждат свои специфични антитела. Те действат чрез "свързване" на антиген или патологичен микроорганизъм, образувайки комплексно съединение "антиген-антитяло" с последваща неутрализация, ензимен лизис, реакции на фагоцитоза и оттегляне от тялото. Именно чрез наличието на определени комплекси методът ELISA определя вида на патогена или вредното вещество, присъстващо в пациента.

Струва си да се помни, че след завършения курс на лечение антителата могат да останат в тялото ни много дълго време, дори след като инфекцията е напуснала тялото ни, т.е. остава така нареченият „серологичен белег“. Например на нощното небе има хиляди звезди. Много от тези звезди отдавна са умрели, но тяхната светлина грее досега, от векове. Всъщност виждаме само звездна пътека. Светлина има, но звездите отдавна ги няма.

Но ако няма светлина, това не означава, че звездата не е била там. Същото е и с антителата. Тяхното присъствие не гарантира наличието на желания инфекциозен агент в организма. Липсата на антитела не означава, че няма инфекция. Ако резултатът от анализа чрез ELISA е положителен, това означава, че трябва да търсите инфекция с по-специфични и скъпи методи - PCR, бактериологични култури. Възможно е фалшиво положителен резултат, ако няколко микроба имат сходна антигенна структура, тогава ще се получат „подобни“ антитела на различни микроби.

Какво представляват имуноглобулините

Открити и проучени са 5 основни класа имуноглобулини - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ролята на останалите все още не е напълно изяснена и е на етапа на научните изследвания.

Основната задача на имуноглобулин А (IgA) е защитните функции на лигавиците на дихателните пътища, стомашно-чревния тракт и пикочната система. С остро начало на заболяването е невъзможно да се идентифицират. Тези защитни комплекси се появяват само от 2 седмици от началото на заболяването, понякога по-късно. По-голямата част от имуноглобулин А се концентрира в лигавичните тъкани. Приблизително 80%. Останалите антитела циркулират в кръвта.

Основните и първите маркери на острата фаза на развиващата се патология са клас М имуноглобулини (IgM). Откриват се до 5-ия ден от началото на неразположението. Присъствието им в кръвта може да се определи за около 6 седмици. Тогава те започват бързо да избледняват.

Остатъчният имунен отговор се характеризира с наличието на имуноглобулини от клас G (IgG) в кръвта. Появата на тези фактори в кръвта се открива около месец след началото на заболяването. В бъдеще те могат да бъдат определени в продължение на много месеци, години и дори цял живот, като изпълняват защитна функция срещу връщането (рецидив) на болестта и в някои случаи правят невъзможно вторичното развитие на патологията.

Ако количеството имуноглобулин G започне да нараства отново, тогава може да се подозира повторна инфекция. Подобно заключение може да се направи чрез провеждане на два до три теста, направени с интервал от 2 седмици..

В практиката на паразитологията се използва имуноглобулин Е (IgE).Имуноглобулин D (IgD) се намира върху В-лимфоцитите и се намира в ниски концентрации при здрави хора. След 10 години живот той достига своите максимални стойности. Количеството на имуноглобулин D се увеличава по време на бременност, при пациенти със системни заболявания на съединителната тъкан, бронхиална астма, заболявания, причинени от имунодефицитно състояние.

Как се извършва кръвна ELISA?

За ензимен имуноанализ в повечето случаи се използва кръвта на пациентите, понякога се взема тъкан на стъкловидното тяло, течност на гръбначния канал, околоплодна течност.

В случай на отрицателни стойности на имуноглобулини IgM, IgG, IgA, можем да говорим за отсъствие на заболяването или неговата начална фаза, а резултатът с минуси е възможен при пълно възстановяване след значително количество време.

Ако IgA и IgM не бъдат открити и IgG се проявява положително, тогава най-вероятно говорим за формирания имунитет след инфекциозно заболяване или след ваксинация.

Ако IgA и IgM не бъдат открити и IgG се проявява положително, тогава най-вероятно говорим за формирания имунитет след инфекциозно заболяване или след ваксинация

В случай на висок титър на IgM с отрицателни стойности на IgG, IgA, може да се заключи, че има остро инфекциозно заболяване.

Едновременните положителни стойности на резултатите от имуноглобулини - IgA, IgM, IgG са характерни за острата фаза на рецидив на съществуващото хронично заболяване.

За хронична инфекция във фазата на затихване на процеса (ремисия), ELISA показва отрицателни стойности на имуноглобулин М (IgM), докато резултатът от имуноглобулини G (IgG) и A (IgA) ще бъде положителен.

Имуноанализ за паразити чрез ELISA

ELISA е съкращение за ензимно свързан имуносорбентен тест за паразити. Това предполага медицинско тестване на имунната система на човек. Тестът се основава на способността на антителата да променят цвета си. Този диагностичен метод има много положителни черти. Например, той е в състояние да открие огромно разнообразие от заболявания, причинени от инфекция. Той е най-ефективен в случаи на заболявания, причинени от паразитни организми..

Какво дава представената технология: определяне на наличието на хелминти в кръвта; търсене на други патогени в тялото; можете да разберете причините за влошаването на вашето здраве; лечението също се основава на анализи, получени по този начин; можете да наблюдавате състоянието на имунната си система.

Друга добра характеристика е възможността за проследяване на маркерите за рак, независимо от техния произход, но в зависимост от тяхното присъствие в тялото, разбира се. Този тест е подходящ и за описание на състоянието на репродуктивната система на човека. Наличието на определени протеини, хормони и пептиди дава възможност да се прецени потенциалът на партньора по отношение на зачеването на дете, както и очакваното качество на бъдещия плод.

Кръвният тест за ламблия е доста популярна практика сред съвременните лекари. В допълнение, този изследователски метод е отличен инструмент за биомедицински анализи и количествена статистика по отношение на специфични антигени..

Как се използва методът ELISA?

Би било голяма грешка да се обърка методът ELISA с метода на сондиране и последващо изследване на изпражненията. Последните се извършват с помощта на методи на микроскопично ниво, когато се взема проба от изпражнения, дадена от пациент, или тя се взема от потенциален пациент директно в медицинско заведение. В пробата те се опитват да открият хелминтски инвазии и други компоненти, по един или друг начин свързани с жизнената активност на паразитите. Изследват се не само микроскопични паразитни организми, но и техните останки, техните яйца и ларви.

Вярно е, че това са по-сложни случаи, така че качеството на такъв анализ ще зависи в голяма степен от работниците в лабораторията, извършващи тестването. Характеристики на технологията и нейната разлика от старите лабораторни изследвания:

  • сега вместо проба от изпражненията се използва кръв, за да се определи наличието на хелминти;
  • изследването на пробата се извършва в лабораторията много бързо, на следващия ден можете да получите пълна информация;
  • цената на лабораторните изследвания е евтина, тъй като теологията е много проста;
  • кръвен тест за хелминти дава висока точност.

Уместността и правдоподобността на резултатите от теста са пряко пропорционални на квалификацията на медицинския персонал, техническото оборудване на лабораторията, както и липсата на всякаква небрежност или невнимание сред лекарите. Въпреки това, дори и най-внимателният и отговорен лабораторен асистент ще изпита огромни трудности, ако паразитът присъства в тялото в минималната му популация или ако съединителят е бил извършен незабавно по време на тестването..

Имунологичен анализ на кръв чрез ELISA

Малко хора знаят какво представляват кръвните тестове от гледна точка на човешката имунологична система, тъй като тези тестове не са толкова често срещани. По правило такъв кръвен тест предоставя информация за вируса на имунодефицита в човешкото тяло и е анонимен, тъй като се провежда по искане на пациента.

По принцип, за ELISA анализ, биологичният материал, който се изследва, е кръв, обаче, цереброспинална течност, съдържанието на стъкловидното тяло, околоплодната течност и др..

За вземане на проби се използва кръв, взета от вена на празен стомах, от която се получава серум за изследване чрез центрофугиране. В допълнение, изследването на кръвен серум може да разкрие редица полово предавани болести (сифилис, херпес, хламидия), както и всички видове хепатит, морбили, рубеола, паротит и токсоплазмоза..

По принцип, за ELISA анализ, биологичният материал, който се изследва, е кръв, обаче, цереброспинална течност, съдържанието на стъкловидното тяло, околоплодната течност и др..

Имуноглобулините са имунни молекули, които могат да се свържат и неутрализират повечето инфекциозни агенти и токсини в тялото. В този случай най-важната характеристика на имуноглобулините е тяхната специфичност, тоест способността да се свързват със специфичен антиген. Именно това свойство се използва за провеждане на кръвен тест за имуноглобулин..

Има пет вида имуноглобулини, но най-изследвани са имуноглобулини А, М и G. Имуноглобулините М и G са активни в кръвта. Имуноглобулините А са вид бариера на повърхността на лигавиците, тъй като те присъстват там в големи количества.

Имунологичният кръвен тест ви позволява да определите вида на имуноглобулините, благодарение на това ELISA позволява не само диагностициране на заболяването, но и определяне на стадия на това и проследяване на динамиката на заболяването:

  • през първите 2 седмици от заболяването се откриват само имуноглобулини А;
  • от 2-ра до 3-та седмица на заболяването в кръвта се откриват имуноглобулини А и М;
  • CC3 за 4 седмици, кръвен тест за имуноглобулин се определя и от трите вида;
  • по време на възстановяването имуноглобулините М изчезват в кръвта и количеството на А и G намалява 2 до 4 пъти;
  • при наличие на хроничен процес имуноглобулините G задължително присъстват в кръвта, имуноглобулините М отсъстват, имуноглобулините А могат да присъстват или да липсват.

Обхват на имунологичния кръвен тест чрез ELISA

  • Диагностика на вирусни заболявания: хепатит, херпес, Epstein-Barr вирус, цитомегаловирус и др.
  • полово предавани инфекции: хламидия, гонорея, трихомонада, микоплазма, уреаплазма;
  • сифилис; ендокринология (определяне на хормонални нива);
  • туморни маркери (диагностика на онкологични заболявания); имунология (диагностика на имунодефицит);
  • алергология (диагностика и лечение на алергии).

Серологичният кръвен тест е лабораторен метод за кръвен тест, който се използва за диагностициране на инфекциозни заболявания и определяне на стадия на инфекциозния процес. Серологичният отговор се основава на взаимодействието на антитела и антигени.

Определянето на антигени се използва за определяне на рода и видовете микроорганизми. Този метод на изследване се използва в урологията и венерологията. Кръв за серологичен кръвен тест се взема сутрин на гладно от вена.

Показания за назначаване и открити заболявания по ELISA метод

Основният биоматериал за ELISA е кръвен серум: в лабораторията се взема кръвна проба от пациента от вена, от която допълнително се отстраняват оформените елементи, които усложняват анализа. В някои други случаи при анализа се използват цереброспинална течност, околоплодни води, мазки от лигавици и др..

За да се избегнат изкривявания в резултатите, се препоръчва да дарявате кръв на празен стомах, а две седмици преди изследването (ако целта е да се диагностицират хронични, латентни инфекциозни заболявания) е необходимо да спрете приема на антибиотици и антивирусни лекарства..

Най-често срещаните цели за анализ са:

  • диагностика на остри и хронични инфекциозни заболявания: IgM и IgG до вирусен хепатит А, В, С, Е, както и антигени на хепатит В и С; IgG към ХИВ; Ig M и IgG към цитомегаловирусна инфекция; Ig M и IgG към вируса на Epstein-Barr; Ig M и IgG към херпесни инфекции; Ig M и IgG до токсоплазмоза;
  • Ig M и IgG за морбили, рубеола, салмонелоза, дизентерия, енцефалит, пренасян от кърлежи и други заболявания; IgG към паразитни заболявания; Ig M и IgG към полово предавани инфекции; IgG до инфекция с Helicobacter pylori. Обща оценка на показателите за човешки имунитет и маркери на някои автоимунни заболявания. Идентифициране на онкологични маркери (фактор на туморна некроза, специфичен за простатата антиген, раково-ембрионален антиген и други). Определяне на съдържанието на хормони в кръвния серум (прогестерон, пролактин, тестостерон, тиреостимулиращ хормон и други).

Предимства на метода ELISA

Безспорните предимства на ELISA са високата чувствителност и специфичност на метода. Чувствителността е способността да разпознава целевото вещество, дори ако концентрацията му в пробата е ниска. Специфичността, от друга страна, предполага точността на диагнозата: ако резултатът е положителен, това означава, че е намерено точно антитялото или антигенът, който е бил приет, а не някои други.

ELISA до голяма степен замени "златния стандарт" на микробиологията - бактериологичен диагностичен метод, по време на който за идентифициране на патогена се изискваше да го изолира от тялото и след това да отглежда културата върху хранителна среда в епруветка в продължение на няколко дни.

През цялото време, докато се извършваше анализът, лекарите бяха принудени да лекуват пациента „на сляпо“, предполагайки за произхода на микроорганизма по симптомите на заболяването. Определянето на IgM с помощта на ELISA ви позволява да поставите точна диагноза още в първите дни на заболяването.

Високата степен на технологичност на ензимен имуноанализ минимизира влиянието на човешкия фактор, което намалява вероятността от грешка. Повечето от тестовите набори и реактиви на ELISA, използвани в съвременните лаборатории, се произвеждат в индустриална среда, което гарантира точен резултат.

Недостатъци на метода ELISA

За съжаление, за да извършите ELISA, трябва да знаете какво точно да търсите: техниката на анализа предполага, че лекарят има предварително предположение за естеството на заболяването. Следователно няма смисъл да се предписва такъв тест с надеждата случайно да се "отгатне" диагнозата.

В случай на диагностициране на инфекциозни заболявания, ензимен имуноанализ не може да намери патогена и да определи специфичните му свойства: той само показва наличието на антитела в кръвта на пациента, индиректно показва наличието на чужд микроорганизъм в човешкото тяло. ELISA е изключително точен, но не евтин метод, така че трябва да го използвате разумно и квалифициран лекар трябва да интерпретира резултатите.

Възможни резултати от ELISA

В зависимост от съдържанието на анализа формулярът може да съдържа данни под формата на таблица, в която са изброени всички антитела или антигени, маркирани с отрицателна или положителна реакция, или ще бъде посочена количествената стойност на резултата (отрицателна, слабо положителна, положителна или рязко положителна)..

Днес се произвеждат хиляди видове тестови системи ELISA, позволяващи откриването на специфични антитела и антигени при голямо разнообразие от патологии. Следователно този анализ се използва в почти всички медицински отрасли. Диагнозата, поставена с помощта на ELISA, е гаранция за назначаването на адекватна терапия и ефективно лечение на заболяването..

Ако имате необходимите реактиви и добра организация на лабораторията, ще получите резултата от теста в рамките на 1-2 дни след вземането на кръв. В някои случаи, ако е необходимо спешно реагиране, този период може да бъде намален до 2-3 часа.

Резултатът от висококачествения ELISA ще бъде недвусмислена присъда: желаното вещество или е намерено, или не е намерено в пробата. Ако говорим за количествен анализ, тогава концентрацията може да бъде изразена като цифрова стойност или определен брой знаци "+" (от един до няколко).