Какво представлява кръвен тест за ELISA

Развитието на съвременната медицина в света на диагностиката не спира да удивлява с постиженията си и сега лекарят няма нужда да прави предположения относно вероятната диагноза, разчитайки само на косвени признаци. Създаването и въвеждането в света на лабораторни изследвания на ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) ви позволява бързо и точно да определите не само присъствието на патогена, но и много други характеристики на заболяването.

История на създаването и развитието на IFA

Този метод за изследване на кръвта започва да се използва в практическата медицина още в средата на миналия век - някъде през 60-те години. Първоначалната му цел беше научно изследване в областта на хистологията, което беше ограничено до търсенето и изследването на клетъчната антигенна структура на биологичните видове. Кръвният тест чрез ELISA се основава на взаимодействието на сродни антигени (AG) и специфични антитела (AT), с образуването на комплекс "антиген-антитяло", определен от ензима.

Това явление накара учените да решат, че методът може да се използва за разпознаване на протеинови съединения от различни класове, образувани в кръвен серум, когато патогенът попадне в тялото. Поради прякото им участие във функционирането на имунната система, тези съединения се наричат ​​имуноглобулини (Ig, Ig) и откритието е най-големият пробив в лабораторната диагностика..

В същото време този силно чувствителен метод започва активно да се използва едва през 80-те години и е достъпен само във високоспециализирани лечебни заведения. Първите успяха да използват ензимни анализатори на имуноанализи в станции и центрове за кръвопреливане, венерически и инфекциозни медицински институции. Това се дължи на бързото разпространение на „чумата на 20-ти век” - СПИН и се наложи спешни диагностични и терапевтични мерки..

Възможности на техниката

Областта на приложение на кръвния тест за ELISA е доста широка - в момента е невъзможно да си представим колко сложно би било търсенето на причината за много заболявания. Подобни изследвания сега се използват в почти всички медицински области, дори в онкологията. Въпреки че е невъзможно за неинформираните да разберат, в някои случаи, след като са го извършили, е било възможно да спасят живота на пациентите, като са открили тумор в ранните етапи..

В съвременните диагностични центрове лабораторните изследвания са представени не само от туморни маркери - те са оборудвани с впечатляващ арсенал от панели за провеждане на тази диагноза. С тяхна помощ е възможно да се определят много патологични състояния, като хормонални аномалии и инфекциозни процеси от различен произход..

В допълнение, провеждането и декодирането на кръвен тест ELISA ще направи възможно проследяването на ефекта на лекарствата върху тялото на болен човек и дори животно. Последният се използва широко във ветеринарните клиники, като спомага за поддържането на здравето на нашите домашни любимци или хранители, като осигурява стабилни доставки на незаменими в диетата месо, млечни продукти и яйца..

Така че, в резултат на приемането на само няколко милилитра венозна кръв и нейната диагноза по метода ELISA, лекарят, след като е описал материалите за изследване, ще може да определи:

  • хормонално състояние, включително биологично активни вещества на половите жлези и щитовидната жлеза, както и надбъбречните жлези;
  • наличието на бактериални и вирусни инфекции (хепатит В и С, сифилис, херпес, хламидия, туберкулоза, мико- и уреаплазмоза, ХИВ, TORCH) и други заболявания от този характер;
  • признаци на жизнена активност на патогени на патологичния процес, завършил с възстановяване и преминал в стадия на образуване на антитела (имунен отговор).

Такива комплекси са много по-лесни за разпознаване и елиминиране от имунните клетки. Остатъчните ефекти под формата на антитела в множество случаи се съдържат в кръвта за цял живот, което практически намалява риска от повторна инфекция до нула.

Разновидности на имуноглобулини

Има няколко вида антитела и всяко от тях участва в процеса на имунния отговор на определен етап. Например, имуноглобулините от клас М (IgM) са първите, които се образуват в отговор на навлизането на хипертонията в тялото. Най-високите им нива се наблюдават през първите дни на заболяването..

Тогава имунната система пуска в плазмата клас G Ig (IgG), които са отговорни за пълното унищожаване на антигените и възстановяването на пациента. По-късно те продължават да бъдат в кръвта, като по този начин подготвят имунитета за многократното попадение на идентичния патоген. Ето как работи ваксинацията. С въвеждането на отслабени антигени на патологични микроорганизми, много имуноглобулини се появяват и остават циркулиращи в плазмата.

И впоследствие, ако възникне патогенен контакт, те бързо се справят с инфекцията, спасявайки тялото от заплахи за здравето. IgA се концентрира в големи количества в лигавиците, блокирайки навлизането на патогенни вируси и бактерии в тялото. IgE са отговорни за убиването на паразитни инфекции и има много други имуноглобулини, участващи в имунния отговор.

Основните обекти, представляващи интерес за лабораторна диагностика, са Ig класове M, G и A. По нивото на тяхната концентрация можете да определите стадия на заболяването и да разберете от какви инфекциозни заболявания е страдал човек през живота си. Например можете да проверите дали в миналото е имало варицела или рубеола. Лекарят, за да разбере дали определен тип AT или AH присъства в тялото на пациента или концентрацията на който и да е хормон, не е необходимо да предписва множество лабораторни изследвания - достатъчно е да напише направление за ELISA.

Същността на техниката

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ за паразити и други микроорганизми - вредители по здравето на организма дава възможност не само да се установи наличието на патогени, но и да се каже за техния брой в кръвната плазма на пациента. По този начин такова проучване позволява както качествен, така и количествен анализ на патогенни микроорганизми, открити в серума..

Нивото на концентрация на патогена значително влияе върху развитието на инфекцията и скоростта на възстановяване, поради което качествената оценка се счита за не по-малко важна от количествената. На нея се дава далеч не последната роля както в лечението на деца, така и на възрастни. Но как е възможно ELISA да разпознае толкова широк спектър от микроорганизми, които паразитират в тялото на хората и животните, причинявайки вреда и намалявайки качеството на живот??

Методологията на изследването се основава на няколко варианта (преки и косвени - състезателни и неконкурентни) за изпълнение на възложените задачи, всеки от които е предназначен за конкретни цели. Този подход позволява целенасочено търсене и в най-кратки срокове да се установи причината за определена патология. За откриване на Ig от различни категории клас се използва плоча с 96 ямки (полистиролов панел) и в ямките му са разположени сорбирани рекомбинантни протеини. Те играят ролята на антигени и в началния етап са в твърда фаза.

Когато попадне в кладенеца с кръвна плазма, антигените или антителата идентифицират обекта във връзка с тяхната ориентация и образуват комплекс (AG - AT). Тази формация се фиксира от ензимно съединение (конюгат), което впоследствие ще се прояви като променено оцветяване на кладенчето. ELISA се произвежда върху специфични тестови системи, произведени в специализирани лаборатории и оборудвани с пълен набор от реактиви.

Този анализ може да се извърши върху шайби - шайби и отчитане на спектрофотометър, но те изискват ръчен труд. Разбира се, няколко пъти е по-удобно и по-бързо лабораторен асистент да извършва всички манипулации на напълно автоматизирани устройства. При използването им лабораторният персонал се освобождава от голямо количество монотонна дейност - измиване, накапване и останалата част от рутината, но не всички лечебни заведения могат да си позволят толкова скъпо оборудване

Тълкуването на изследователски материали е изключително компетентност на специалист по лабораторна диагностика - само на него могат да се разкажат резултатите за спецификата и тънкостите в хода на заболяването. В този случай лекарят трябва да вземе предвид възможността за получаване на фалшиво отрицателни или фалшиво положителни отговори..

Декодиране на материали

Резултатът от висококачествен ензимен имуноанализ трябва да бъде недвусмислено заключение дали в тази кръвна проба е открит желаният микроорганизъм или не. Количественият анализ ще покаже нивото на концентрация и може да бъде изразен по два начина - чрез стойност в цифри или чрез броя на знаците "+".

Анализирани показатели

По време на изследването се извършва внимателно проучване на основните имуноглобулини, участващи в имунния отговор, като например:

  • IgM - откриването на този клас означава развитие на остра форма на инфекциозно заболяване. Отрицателният резултат от търсенето на IgM може да бъде както доказателство за отсъствието на желания патоген, така и за прехода на болестта в хроничен ход.
  • IgA - определянето на този клас при липса на IgM в повечето случаи е сигнал за хронична или латентна форма на развитие на инфекциозно заболяване.
  • IgM и IgA (едновременно присъствие) - положителни резултати и за двата типа показва самия връх на острата форма на патология.
  • IgG - неговото присъствие показва трансформация на болестта в хронична форма или възстановяване и формиране на имунитет към определящия агент.

Появата и натрупването на определен клас IS се случва на различни времеви етапи. Така например, IgM се появява първи, около 5 дни след като патогенът удари. IG остават в кръвта за около 5-6 седмици и след това постепенно изчезват. Понастоящем те са достъпни за определяне чрез ELISA. Около 3-4 седмици след началото на заболяването се появява IgG, който впоследствие може да остане няколко месеца. Но при анализа те не винаги се намират.

IgA се образуват в кръвта в периода 2-4 седмици, докато 20% от тях се съдържат в серума, а 80% в секрецията на лигавиците. По правило тези имуноглобулини изчезват в рамките на 2-9 седмици, което показва унищожаването на патогена и възстановяването на пациента. Ако ELISA все още показва наличието на IgA, това сигнализира за прехода на процеса в хронична форма..

Опции за резултатите от анализа

В зависимост от получените данни отговорите на ELISA могат да бъдат издадени на формуляр под формата на таблица с пълен списък на всички AT и AG и индикация за положителна или отрицателна реакция. В определени ситуации ще се покаже количествена стойност - рязко положителен, положителен, слабо положителен или отрицателен резултат. Вторият вариант показва количеството антитела, съдържащи се в изследваната кръвна проба.

В допълнение към горните стойности в процеса на ELISA се изследва и друг количествен параметър - индексът на авидност AT, изчислен като процент. Той показва колко дълго продължава болестта - тоест колкото по-висок е показателят, толкова повече време се развива патологията.

Алтернативен метод ELISA

Ензимният имуноанализ е доста известна и често срещана диагноза. Може би някои никога не са чували за него, но има друга версия на това проучване, която е още по-малко известна на широк кръг хора, при която се взема проба от некръв. Тази техника се нарича анализ на изпражненията за окултна кръв и в много случаи ви позволява да избегнете допълнителни изтощителни процедури, които също са придружени от неприятни усещания..

ELISA тест за окултна кръв (молекули на хемоглобина) дава възможност да се открие кървене от храносмилателната система, дори незначително, признаците на което в изпражненията на пациента, както се казва, не могат да бъдат открити с невъоръжено око. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ при човешки изпражнения за кратко време може да покаже пептична язва, полипоза, дивертикулоза, тумори, които не са придружени от определени симптоми в ранните етапи.

Към днешна дата са създадени хиляди разновидности на системи за тестване на ензимни имуноанализи, които дават възможност за намиране на AT и AG на огромен списък от патологии. Следователно този анализ се използва в почти всички клонове на медицината за всяка възрастова категория. И абсолютната безвредност ви позволява да прибягвате до нея както по време на бременност, така и за диагностика на изтощени пациенти.

ELISA анализ: какво е това? защо е необходимо? плюсове и минуси на метода

ELISA анализ - какво е това? Пълното име на този диагностичен метод се нарича ензимно-свързан имуносорбентен анализ и се основава на определянето в периферната кръв на антитела от различни класове или имуноглобулини, които се произвеждат от човешкото тяло..

В практиката на лекар, ELISA анализът заема много важно място, когато е необходимо да се диагностицира всяка инфекциозна патология. Този анализ показва не само наличието на инфекциозно заболяване, но и етапа на патологичния процес. Също така, не само по отношение на патогена, методът ELISA е показан за употреба: той се използва за диагностициране на алергични състояния. Този тест ви позволява да идентифицирате проблеми в имунната система, при много заболявания на хемопоетичната система, автоимунни и други нарушения.

Защо е необходима IFA?

Всички изследователи са склонни да вярват, че името "антитяло" е твърде жалко. И все пак, тя отразява една важна характеристика на имуноглобулините: те са способни да свързват и неутрализират вредните вещества, като ги приближават като „ключ“ към „ключалка“. Количеството антитела в кръвта отразява не само общата способност на организма да се защитава срещу инфекции, но и способността да образува циркулиращи имунни комплекси, които могат да се появят при различни автоимунни заболявания, например при ревматоиден артрит или анкилозиращ спондилит..

Комплекси от антитела с антиген (вреден фактор с инфекциозен характер) са резултат от реакцията на организма към въвеждането на "външни лица". Следователно имунната система се научава да ги разпознава, с помощта на лимфоцити, тя обучава имунокомпетентни клетки и те са в състояние да произвеждат силно специфични антитела. И така, антителата към вируса на Епщайн са подредени по различен начин, отколкото антителата към вирусен хепатит С или към Е. coli и анти-HAV, или антитела към вируса на хепатит А - по различен начин от автоантителата към хрущялната тъкан. Именно високата специфичност и съответствието на имуноглобулините с инфекциозен агент прави висока стойност за такива лабораторни изследвания като ензимен имуноанализ.

След силна връзка на антитела и антигени в един комплекс (антиген-антитяло), вредните фактори губят способността си да увреждат тъканите на тялото, а след това тези комплекси или се неутрализират или лизират от фагоцитоза от неутрофили и, „усвоявайки се“, напускат тялото.

Кръвният тест с ELISA може да покаже с какъв специфичен патогенен фактор е изправено нашето тяло, на какъв етап е процесът на взаимодействие между тялото и инфекцията. След проучването лекарят може да направи прогноза с висока степен на увереност, да предпише определени видове лечение и в някои случаи дори да определи продължителността на живота на пациента, особено при хронични вирусни инфекции, например при вирусен хепатит С.

Но в някои случаи в организма изобщо няма инфекциозни агенти и антителата „по погрешка“ атакуват собствените им органи и тъкани, тъй като имунокомпетентните клетки получават фалшива информация. Такива заболявания се наричат ​​автоимунни, а ензимният имуноанализ също помага да се разпознае тази хронична патология и да помогне в диагностиката.

Повече за имуноглобулините

Общо човешкото тяло произвежда 5 известни класа антитела, които са обозначени като Ig (което означава имуноглобулини), които принадлежат към класове A, M, G, E и D. Всички те са от голямо значение при интерпретирането на резултатите от ELISA анализ. Разбира се, има много повече комплекси и не всички от тях все още са отворени. Но при диагностицирането на различни заболявания първите три вида антитела са най-ценни. Кръвният тест за ELISA използва възможно най-много информация: моментът на поява на антитела в кръвта, промяната в тяхната концентрация в зависимост от времето, периода на изчезване, както и вида на специфичните антитела.

И така, участниците в първичния, остър инфекциозен процес са имуноглобулини от клас М, които винаги показват остра фаза, дори ако болестта е клинично изтрита. Типичен пример е аниктеричната форма на остър вирусен хепатит В или С. Ензимно-свързан имуносорбентен тест за хепатит ще покаже, че човек има остър хепатит и симптоми като болка в хипохондриума, сухота в устата, болки в ставите и други неспецифични симптоми стават лесно разбираеми.

Няколко седмици по-късно тези антитела се откриват във все по-изчезваща концентрация, отстъпвайки на имуноглобулините от клас G. Те се определят в кръвта в продължение на много месеци и дори години и показват или възстановяване, и след това те могат да останат за цял живот, образувайки силна имунна система. Това показва мощна защита срещу патогенни антигени. И така, именно антителата от този клас правят човека имунизиран срещу повтарящи се случаи на антракс и чума. Но има моменти, когато тези антитела не предотвратяват вредното им въздействие в присъствието на антигени. В този случай можем да говорим за увеличаване на активността на хроничен процес..

Що се отнася до IgE, той има приложение при диагностицирането на различни паразитни инвазии и алергични състояния, а IgD изпълнява спомагателна функция: ензимно-свързаният имуносорбентен анализ позволява използването му в сложната диагностика на бронхиална астма и автоимунни състояния. Разбира се, дешифрирането на ELISA анализа е много по-сложно и специалистите - имунолозите могат да разкажат много повече. Какви са индикациите, че пациентът може самостоятелно да кандидатства в лабораторията за извършване на изследвания?

Показания за анализ

На първо място, трябва да разберете, че няма такъв анализ - „просто кръв за ELISA“. Има анализ за хепатит, случва се - за уреаплазма или за сифилис. По този начин, даряването на кръв за ELISA може да бъде насочено само чрез "нареждане" за търсене на желаната инфекция. Просто е толкова неразбираемо защо да дарявате кръв от вена, без да знаете какво да търсите. Ето защо ензимният имуноанализ е мощен инструмент, който е важен при диагностичното търсене. Само лекар може да предпише този анализ, тъй като той целенасочено търси инфекция, която се характеризира с тези симптоми. Обикновеният човек, разбира се, може да поръча 150 кръвни теста чрез ELISA за „всички инфекции“, но това би било неразумен и скъп подход към диагностиката, вземайки тестове за всичко.

Най-търсеното назначаване на тези тестове за следните заболявания и състояния:

Различни микробни и вирусни инфекции, симптоми на инфекциозни заболявания - обрив, треска, жълтеница, подути лимфни възли, синдром на диария, съмнения за полово предавани болести.

Техниката ELISA помага при определянето на уреаплазма и микоплазма, сифилис и хламидия, туберкулоза и цитомегаловирусна инфекция, херпес, вирусен хепатит и вирус Epstein-Barr. Понастоящем около 500 различни инфекции могат да бъдат проверени с помощта на ензимен имуноанализ.,

Ако подозирате хелминтска инвазия и наличие на симптоми като алергии, еозинофилия в кръвта, сърбеж, диспепсия и загуба на тегло,

Прочетете повече за този тип изследвания в статията "Кръвен тест за глисти и паразити: методи за изследване, ELISA, на кого и как да дарявате?".

Когато се идентифицират алергени, които причиняват оток на Квинке, уртикария, задух и пристъпи на астма.

В този случай се откриват специфични Ig E и има цели алергични панели, които ще помогнат за точното определяне на алергена - калмари или скариди, суха храна за риби, съдържащи дафния, домашен прах. При полиноза този метод ви позволява да намерите точно зърнените култури, храсти или дървета, които причиняват пролетно кихане и сълзящи очи,

  • Този метод е показан при съмнение за автоимунни заболявания, които се лекуват от ревматолози,
  • Ако се подозира растеж и активност на тумора,
  • В комплексната диагностика на имунодефицитни състояния и ХИВ - инфекция,
  • За кръвни заболявания и при трансплантация, за цялостна оценка на имунитета, например преди чернодробна или бъбречна трансплантация.

Сега знаем защо трябва да дарите кръв за ELISA. Разберете как се провежда това проучване.

Как се прави анализът?

Класическият материал е венозната кръв на пациента. Но ако е необходимо, можете да изследвате голямо разнообразие от течности и тъкани: слуз, слюнка, цервикален секрет, цереброспинална течност, стъкловидно тяло на окото, съдържанието на пъпната връв и околоплодната течност. Важно е да запомните, че приемането на различни лекарства, прекомерната физическа активност, злоупотребата с алкохол могат силно да изкривят резултатите от теста..

Има няколко метода, които позволяват този анализ. Най-често използваният метод в клиничните лаборатории е фотометричният метод. В този случай се използват вещества, маркирани с боя, след реакцията на които и маркирането на комплекса антиген-антитяло, цветът им се променя. В резултат на това оптичната плътност на разтвора също се променя и тази промяна е право пропорционална на концентрацията на откритите антитела. За измерване на тези отклонения успешно се използват лабораторни спектрофотометри.

Също така, за ELISA се използва флуорометричен метод, който се основава на флуоресценция. И тук се изчислява интензивността на флуоресцентни вещества, които са се утаили върху изследваните проби..

И накрая, имунологичният анализ използва електрохимични методи за определяне на активността на ензимите, които са специфични етикети за антигени и антитела. Самият ензимен имуноанализ най-често включва използването на ензими като алкална фосфатаза, пероксидаза от хрян и галактозидаза. Тези ензими са способни да се свързват с антитела или антигени и да ги маркират поради тяхната активност.

Недостатъци на метода и неговите плюсове

Очевидните "плюсове" включват демократичната цена на анализа, възможността за скрининговото му използване при големи групи от населението, например при изследване на бременни жени за ХИВ. Методът на ензимен имуноанализ е доста специфичен и може да се използва за контрол на качеството на лечение на много заболявания. Важно е анализът да се подготви бързо и да е прост и безопасен за пациента..

Има обаче много клопки. Така че, ако имуноглобулините не бъдат открити, това не означава 100% отсъствие на болестта. Наистина, на фона на имунодефицита, тялото просто може да не „има сили“ да синтезира антитела. Ако пациентът има тежка чернодробна недостатъчност, тогава черният дроб просто не е в състояние да синтезира протеин - градивен елемент за антитела. В този случай резултатът се нарича серонегативен и потвърждаването на инфекцията се изисква чрез директен и най-усъвършенстван изследователски метод - PCR, или полимеразна верижна реакция. За разлика от ензимно-свързания имуносорбентен анализ, този метод не разкрива реакцията на организма към инфекциозния процес (който може да е дефектен или да липсва изобщо), при PCR наследственият материал се определя директно или се локализира самият патоген.

Методът на ензимен имуноанализ може да даде грешка на фона на много хронични заболявания, на фона на имуносупресивна терапия. В хелминтологията и паразитологията има закон: само откриването на паразит или неговите яйца е абсолютно надежден начин за поставяне на диагноза. ELISA може да осигури кръстосани и фалшиво положителни методи, отговарящи на много нормални събития в живота на пациента.

В заключение трябва да се каже, че ензимно-свързаният имуносорбентен анализ е мощен, но спомагателен начин за лабораторна диагностика на много заболявания. Но във всеки случай диагнозата трябва да се основава на много фактори: оплаквания и анамнеза на пациента, данни от прегледа, други спомагателни и инструментални диагностични методи.

Какво е ензимен имуноанализ?

С напредъка на съвременната медицина е възможно да се извърши по-задълбочена диагностика в случай на съмнение за определени патологии при пациент. Един от информативните методи на лабораторни изследвания е ELISA анализ, който се извършва по метода на вземане на проби от венозна кръв. Тоест за пациента като цяло нищо не се променя. Но лабораторният анализатор ELISA провежда сложна техника за изследване на събрания биоматериал. Какво представляват ELISA анализите и какви са тънкостите при използването на ELISA метода като диагностичен, разбираме материала по-долу.

Какво е ензимен имуноанализ?

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ е един от методите за лабораторна диагностика, който се основава единствено на реакция, наречена „антиген-антитяло“. Тук си струва да се разбере, че антигенът е чуждо протеиново съединение (молекула), което е попаднало в човешкото тяло с паразитна, вирусна или друга инфекция. Тоест това е просто вредител. На свой ред, антитялото е имунна клетка (имуноглобулин), която защитава човешкото тяло, когато в него се открият чужди молекули.

Производството на антитела се провокира от самите антигени, проникнали в човешкото тяло. Когато влизат в „битката“ за здравето на тялото, антителата сякаш маркират антигените, което лаборантът вижда при изследване на кръвта. Тоест в събрания биоматериал е възможно да се проследи не само наличието на инфекция, но и нейните следи, след като тялото се възстанови напълно.

Когато извършва ELISA тест, лабораторен асистент може да види следните имуноглобулини към антигени:

  • Имуноглобулини М (изброени като IgM в резултатите). Те показват, че инфекциозният процес в организма само набира сила. Тоест заразата се е случила съвсем наскоро;
  • Имуноглобулини G (изброени като IgG). Допринасят за унищожаването на антигени няколко дни след въвеждането на инфекцията в човешкото тяло. Имуноглобулините G могат да бъдат в тялото на пациента дълго време, образувайки имунитет към определен вирус;
  • Имуноглобулини Е (изброени като IgE). Посочете паразитни инфекции в организма. Той също така говори за атопични реакции при алергии. Струва си да се знае, че тестът ELISA дава резултат с точност от 90% за паразитни инфекции;
  • Имуноглобулини А (изброени като IgA). Защитете лигавиците на пациента, доколкото е възможно.

По този начин, чрез предписване на ензимно-свързан имуносорбентен тест на пациент, лекуващият лекар може да проследи продължителността на инфекцията, степента на нейното развитие или да разкрие наличието на имунитет към определена инфекция..

Процесът на диагностика ELISA изглежда така:

  • Събраната венозна кръв се довежда до състоянието на кръвен серум в лабораторията;
  • Тогава лаборантът използва специална тава с клетки, всяка от които вече съдържа всички необходими антигени. Достатъчно е просто да пуснете кръвен серум във всяка клетка и да проследите реакцията на имуноглобулините (антителата) към антигените. Наличието на "желаната" реакция се показва чрез промяна в цвета на тестовия материал. В бъдеще лаборантът изследва оптичната плътност на изследваната среда.

Като цяло, ензимен имуноанализ за паразити помага да се идентифицират такива паразитни патологии:

  • Аскаридоза и ентеробиоза (аскариди и острици);
  • Трихинелоза;
  • Описторхоза в остра и хронична форма;
  • Ламблиоза;
  • Амебиоза;
  • Токсоплазмоза;
  • Лайшманиоза под всякаква форма.

Важно: ензимният имуноанализ може да бъде както качествен, така и количествен. В първия случай лаборантът само потвърждава или опровергава наличието на желаното вещество в кръвта. Във втория случай в резултат на анализа се посочва концентрацията му в тялото на пациента.

Недостатъци на метода

С всички предимства на този диагностичен метод трябва да се разбере, че ензимно-свързаният имуносорбентен анализ не е начин за откриване на причината за заболяването на пациента, а само метод за потвърждаване на диагнозата, предложен от лекуващия лекар. И тъй като изследванията не са достатъчно евтини, трябва да ги използвате разумно. Освен това резултатите от изследването трябва да се тълкуват само от квалифициран специалист..

Подготовка за тестване на паразити

Важно е да се разбере, че идентифицирането на паразити чрез кръвен тест изисква известна подготовка от пациента. Така че, преди да дарите кръв, трябва да направите следното:

  • В деня преди вземането на проби от биоматериал, мазнините, алкохолът и пушените меса трябва да бъдат изключени от диетата;
  • Кръв за ензимно свързан имуносорбентен тест за паразити и други инфекции трябва да се взема сутрин на гладно;
  • Забранено е пушенето поне 3-4 часа преди даването на кръв;
  • В деня на вземане на кръв е препоръчително да не сте нервни и да не прибягвате до повишена физическа активност.

Спазването на тези правила ще избегне фалшиво положителен резултат за антитела срещу паразити..

Декодиране на резултатите

След като сме подредили съкращението ELISA и какво е ─ разбрахме, струва си да преминем към интерпретацията на резултатите. Тук е важно да се разбере, че ако анализът е бил качествен, резултатът ще бъде само положителен или отрицателен. Тоест диагнозата или потвърждава подозренията на лекаря по отношение на определена диагноза, или ги опровергава. В този случай формулярът ще съдържа съответно символи "+" или "-".

Важно: отрицателният резултат от теста не винаги показва липса на инфекция. Факт е, че антителата към антигените могат да се образуват в рамките на 14 дни след инфекцията и е вероятно те все още да не са се образували.

Ако се извърши количествен анализ, тук се определят вида на антителата, тяхното количество и степен на активност. По-специално, с такава диагноза се определят антитела (имуноглобулини) IgG и IgM, които се образуват в различни периоди от прогресирането на инфекцията. Най-честите резултати в този случай са:

  • Повишен IgM и пълно отсъствие на IgG. Тази картина показва скорошна инфекция и острата фаза на патологията..
  • Повишена активност на двата вида имуноглобулини (IgM и IgG). Говори за дългогодишен и хроничен ход на инфекциозния процес.
  • IgG активност и пълно отсъствие на IgM. Инфекцията е била преди поне шест месеца и сега вирусът е в продължителен хроничен стадий.
  • Липса на IgG и IgA антитела. Резултат недефиниран.
  • Липса на IgM, IgA и IgG антитела. Показва липса на имунитет към конкретна инфекция.
  • Активността на IgG, IgM и IgA антитела показва обостряне на хроничния процес.

В допълнение към идентифицирането на видовете антитела, лаборантът в специална колона на формуляра посочва техния брой върху обема на кръвта. Не забравяйте, след като разберете какъв е методът ELISA, не интерпретирайте резултатите сами. Получените резултати могат да бъдат тълкувани с точност само от лекуващия лекар в зависимост от предполагаемата диагноза, изградена въз основа на клиничната картина на пациента..

ELISA кръвен тест

Извършва се ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за цялостна оценка на защитните функции на организма. В хода на изследването се определят броят и свойствата на имунните клетки, наличието на необходимите антитела. Кръвният тест ELISA се извършва за диагностициране на инфекциозни, хематологични, автоимунни заболявания, първични и вторични имунодефицити. Помислете какво представлява ELISA кръвен тест и какви индикации съществуват за това проучване.

Какво е

Кръвният тест ELISA е лабораторен тест, който открива антитела или антигени в кръвна проба. Това проучване се използва за откриване на нивото на имуноглобулини, имунологични комплекси, хормони.

Показания за анализ

За назначаването на кръвен тест с ELISA има следните индикации:

  • диагностика на полово предавани инфекции - уреаплазма, микоплазма, хламидия, трихомонада, сифилис;
  • диагностика на вирусни заболявания - цитомегаловирус, херпес, хепатит, вирус Epstein-Barr;
  • определяне на хормонални нива;
  • диагностика на онкологични заболявания;
  • дефиниция на имунодефицит;
  • диагностика на алергии;
  • предоперативен цялостен преглед преди трансплантация на органи;
  • оценка на ефективността на терапията.

Метод принцип

Принципът на действие на ензимно-свързания имуносорбентен метод се основава на определянето на специфични антитела протеини в кръвта - имуноглобулини. Имуноглобулините се произвеждат от имунната система на човека, когато антигени (чужди микроорганизми) попаднат в тялото. Тези имунни молекули се свързват и неутрализират много инфекциозни агенти в организма..

Имуноглобулините имат важна характеристика - специфичност. Благодарение на това те могат да се свържат със специфичен антиген, образувайки антиген-антитяло комплекс. По време на ELISA кръвен тест именно този комплекс се определя качествено и количествено.

Има пет класа имуноглобулини. Но обикновено се определят три класа - имуноглобулини A, M, G. Тези антитела се натрупват в тялото по различно време от момента на инфекцията.

  • Имуноглобулините от клас М (IgM) се появяват в кръвта най-напред на петия ден от момента на инфекцията. Те остават в тялото 5-6 седмици, след което изчезват от кръвта. IgM антителата показват остър период на заболяването или обостряне на заболяването в хроничния му ход.
  • Около 3-4 седмици след инфекцията в кръвта се появяват имуноглобулини от клас G (IgG). Те могат да съществуват в човешката кръв в продължение на няколко месеца или дори години. Според транскрипта на кръвен тест ELISA, ако в две кръвни проби, взети последователно две седмици по-късно, количеството IgG имуноглобулини се увеличи, те говорят за текуща инфекция или реинфекция - повторна инфекция със същата инфекция.
  • Имуноглобулини от клас А (IgA) могат да бъдат открити чрез този метод на изследване 2-4 седмици след инфекция или обостряне на инфекциозно заболяване. От тях само 20% циркулират в кръвта, останалите са в секрета на лигавиците. IgA антителата изчезват от кръвния поток в рамките на 2-8 седмици след унищожаването на инфекциозните агенти. Изчезването на тези имуноглобулини означава лек за инфекцията. Ако след края на заболяването се установи наличието на IgA антитела в кръвта, това означава, че болестта е преминала в хроничен стадий.

Подготовка за анализ

За анализ на кръв чрез ELISA най-често се използва човешка кръв. Но можете също да изследвате съдържанието на стъкловидното тяло, цереброспиналната течност, околоплодните води.

Кръвна проба за изследване се взема от пациента от кубиталната вена. Препоръчва се да дарявате кръв на празен стомах (трябва да минат поне 12 часа от последното хранене). Необходимо е да информирате лекаря, ако пациентът приема лекарства, тъй като някои от тях могат да променят резултата от теста. Надеждността на резултатите от изследването се влияе от приема на алкохол и наркотици.

Декодиране

Формата на резултата от този анализ показва положителен (+) или отрицателен (-) резултат от определянето на всеки клас имуноглобулини.

Помислете за тълкуването на възможна интерпретация на кръвен тест ELISA.

  • Отрицателен резултат IgM, IgG, IgA - липса на имунитет срещу инфекция.
  • Отрицателни IgM, IgA и положителни IgG - постинфекциозен или постваксинален имунитет.
  • Отрицателни или положителни IgG, IgA и положителни IgM - остра инфекция.
  • Положителен резултат от IgM, IgG, IgA - обостряне на хронично инфекциозно заболяване.
  • Отрицателни IgM и отрицателни или положителни IgG, IgA - хронична инфекция.
  • Отрицателен IgM резултат и IgG не се откриват, IgA - възстановяване.

Предимства на метода

Кръвният тест ELISA има много предимства. Основните могат да бъдат разграничени:

  • относително висока точност (чувствителност);
  • възможността за ранна диагностика;
  • способността да се проследява динамиката на инфекциозния процес;
  • високо ниво на обединение, което позволява масови прегледи;
  • кратък период от време, необходим за получаване на резултата от анализа;
  • лекота на използване;
  • автоматизация на всички етапи на анализ;
  • относително ниска цена.

недостатъци

Недостатъкът на ELISA е, че понякога дава фалшиво отрицателни или фалшиво положителни резултати. В допълнение към техническите грешки по време на проучването, причината за фалшивите резултати може да бъде ревматоидният фактор на пациента, наличието на хронични заболявания (при които се произвеждат антитела), метаболитни нарушения и прием на някои лекарства.

ELISA кръвен тест за паразити

С помощта на този метод за кръвен тест се определя наличието на следните паразитни процеси в организма:

  • аскаридоза;
  • трихинелоза - анализът се извършва няколко пъти, максималното ниво на антитела се определя на 4-12 седмици след инфекцията;
  • цистицеркоза;
  • тениаза;
  • фасциолиаза - антителата се определят в острия стадий на заболяването;
  • описторхоза - извършват диференциална диагноза между хроничната и острата форма на заболяването;
  • лямблиоза;
  • висцерална и кожна лайшманиоза;
  • амебиаза;
  • токсоплазмоза.

Кръвният тест ELISA за паразити се използва за откриване на антигени (паразити и техните метаболитни продукти) и антитела (имуноглобулини). Имуноглобулините се произвеждат в организма като антитела към антигените. Специфичността на този метод при определяне на паразитите е 90%. С помощта на този анализ е възможно да се определи видът на паразитите, техният брой и, благодарение на нивото на антителата, да се проследи динамиката на развитието на процесите.

ELISA: как се прави анализът? Разходи. Декодиране на резултатите

Високоточните методи за анализ са неразделна част от съвременната медицина и по-специално диагностиката. Наличните в наше време диагностични методи позволяват своевременно да се идентифицира не само самият факт на присъствието, но и броят на паразитите в тялото на пациента.

Сега, като правило, на пациентите се предлага да преминат само един тест - ензимен имуноанализ.

Прилагане на кръвен тест ELISA

Ензимният имуноанализ е тясно специализиран вид анализ, който се извършва в лаборатория. Анализът се основава на реакцията на организма, обикновено наричана "антиген-антитяло".

Методът за анализ, базиран на този показател, дава точност от 99%. Това е най-точният метод, познат днес. На практика почти няма случаи, когато подобен анализ дава фалшиви резултати..

Този метод ви позволява да идентифицирате:

  • значителен брой инфекциозни заболявания, причинени от паразити;
  • наличието на различни видове туморни маркери;
  • в репродуктивната медицина - наличието на протеини, хормони и пептиди, необходими за оценка на плодовитостта на пациента;

Надеждността на резултатите от теста зависи от няколко фактора:

  • специфичен вид паразит;
  • броят на паразитите в тялото;
  • скоростта им на възпроизводство.

Кога се прилага този тип анализ??

Ензимният имуноанализ се използва широко при диагностицирането на голямо разнообразие от заболявания. Основната му стойност е, че ви позволява точно да идентифицирате заболявания, които са асимптоматични.

Както знаете, подобни заболявания често са проблематични за откриване на ранен етап и съответно започват да се лекуват навреме..

Какви заболявания се диагностицират с помощта на ензимен имуноанализ:

  • онкологични заболявания;
  • полово предавани инфекции (ХИВ, хламидия, сифилис, уреаплазмоза, херпес и други заболявания);
  • туберкулоза, морбили, токсоплазмоза, хепатит и така нататък;
  • хормони на щитовидната жлеза;
  • полови хормони;
  • различни автоимунни нарушения;
  • алергични реакции и непоносимост към определени храни.

На какви фактори се основава ELISA?

Тази процедура помага да се идентифицират:

  • инфекция на тялото с бактерии и вируси;
  • протеинова основа;
  • хелминтски инвазии;
  • чужди тела.

Всъщност процедурата ELISA се състои от две части:

  1. имунен отговор;
  2. ензимна реакция.

Същността на принципа "антиген-антитяло" е, че причинителят на болестта или чуждо тяло, тоест антигенът, навлиза в тялото постепенно заедно с източника на инфекцията. Този процес предизвиква така наречения имунен отговор, предназначен да предпазва тялото от чужди елементи..

Проявата на такава защита зависи от самия антиген и от симптомите на заболяването, причинено от него. Тази схема се нарича "антиген-антитяло".

За по-голяма диагностична надеждност цялата процедура за ензимен имуноанализ се извършва само в лаборатории и медицински центрове. Различни антигени и антитела взаимодействат с кръвната проба.

За да се идентифицират както видът, така и броят на паразитите в тялото на пациента, се използва имуноглобулин от класове "А" и "Е", който реагира на паразитни инвазии.

Такъв анализ трябва да разкрие:

  • IgM;
  • IgA;
  • IgG;

Какво е имунен отговор и как се определя разпознаването на антиген?

Имунният отговор показва биологични връзки в молекулите на микробните клетки, за наличието на които се извършва анализът. Имунният отговор като такъв е само един от компонентите на цялостна ELISA програма, докато вторият компонент е ензимна реакция.

Разпознаването на антиген се случва по време на контакта на клетка от имунната система (имуноцит) с чужда клетка. Индивидуалните характеристики на антигените служат като средство за разпознаване на „приятел или враг“ за имунната система.

Какво представляват антителата?

Всъщност антитялото:

  • Това е просто молекула, разположена на повърхността на имуноцит..
  • Тази молекула се използва за разпознаване на чужди клетки..

Предаването на получената информация за антигена става на клетъчно ниво. Връзката се разрушава, ако клетката е имунна, ако не, тялото започва естествена защитна реакция.

Съвременната наука познава 5 класа антитела, иначе наречени имуноглобулини или протеинови структури.

Латинските букви се използват за означаване на антитела: A, D, E, G и M.

В резултатите от анализа тези обозначения изглеждат така:

  • IgA;
  • IgD;
  • IgE
  • IgG;
  • IgM.

Процедура за имуноанализ

На първо място е необходимо да се подготвят специални полистиролови плочи, които съдържат 96 ямки. Преди анализ стените на всяка клетка се обработват с адсорбиращ антиген.

Кръвният серум се капе в третираните клетки. Хомоложните антитела и антигени реагират помежду си, образувайки силни връзки. Незакрепените тела се измиват. След това към ямките се добавят имуноглобулинови антитела заедно със специално маркирани ензимни елементи.

Реагентите са маркирани, за да улеснят идентифицирането на антитела в анализирания серум. След изплакване се добавя хромогенен елемент, който ускорява реакцията и оцветява ямките. Интензивността на цвета в сравнение с изследвания ензим показва приблизителния процент на антиген в кръвната проба.

След това техникът използва оптичната течност за:

  • измерва концентрацията на антитела в ямките;
  • сравнете получения резултат с контролна проба, т.е. стандарт;
  • изчислява концентрацията на антитела с помощта на специална скала.

За анализа на хелминтски инвазии се използва специална версия на системата за тестване, със собствен набор от показатели за нормата и отклонения от нея.

Подготовка за анализ

Вземането на проби от кръвен серум за ензимен имуноанализ се извършва само в лаборатория. Те вземат кръв от вена, премахват елементи оттам, които могат да повлияят на процеса на анализ и точността на резултатите от него. Вземете анализ сутрин на гладно.

Декодиране на резултатите от ензимен имуноанализ

Качеството и количеството на антителата показва наличието на чужди елементи в тялото на пациента, включително патогени. Същите признаци показват, че в организма е започнал възпалителен процес..

Пример за декодиране на резултатите от ELISA:

Етап на заболяванетоIgAIgMIgG
Основна (2 седмици от момента на заразяване)+--
Първичен (2,5-3 седмици от момента на заразяване)++-
Първичен (3-4 седмици от момента на заразяване)+++
Обостряне на хроничната фаза (2 седмици от началото на обострянето)+-+
Хронична+/--+
Минало (зарастване на инфекцията)--+
ВъзстановяванеТитърът намалява 2-4 пъти след успешно лечение-Титърът намалява 4-8 пъти след 1-1.5 месеца след успешно лечение
Резултатът е отрицателен---

Сам по себе си количественият анализ, извършен по този метод, все още не дава възможност за точно диагностициране на заболяването, предписване на курс на лечение и определяне на дозата на лекарствата..

Плюсове и минуси на ELISA

Всички методи за тестване, дори и най-модерните и с висока точност, за съжаление, освен своите предимства, имат и своите недостатъци..

Ползи от ензимен имуноанализ:

  • Специализация на диагностичния метод;
  • Повишена чувствителност на този метод;
  • Прилагане на най-новите технологии.

Чувствителността на диагностичния метод е голяма вероятност да се намери желаният, дори ако концентрацията му в тестовия материал е изключително ниска.

Специфичността на техниката означава:

    висока степен на надеждност, тоест няма риск от получаване на фалшив резултат. Ако резултатът е положителен, тогава на пациента се гарантира, че ще бъде открит точния вид паразит, от който страда;

  • въздействието върху резултата от „човешкия фактор“, тоест възможни грешки на лаборанта, се свежда до нула, което също допринася за увеличаване на точността.
  • Възможни недостатъци на този метод за анализ:

    1. Това предполага определянето на естеството на заболяването, тоест невъзможно е интуитивно да се „отгатне” правилната диагноза в този случай;
    2. Високи разходи за анализ.

    Сравнение на дуоденален и директен ензимен имуноанализ

    Процедурата ELISA директно използва способността на антителата да намират антиген чрез образуване на връзки с етикети. Този метод за анализ се счита за индустриален, времето за изчакване на резултата е не повече от час.

    След ферментация се появява специален етикет на субстрата. Нивото на антителата съответства на дела на антигените в изследвания биоматериал.

    Съществува и дуоденален (иначе - косвен) метод за изследване на паразитни инвазии, който се използва широко, въпреки високата точност на ELISA.

    Дуоденален (индиректен) ензимен имуноанализ се извършва на 2 етапа:

    1. Първо, белязаните антитела се сравняват с желаните антигени;
    2. Нанесете маркирани антитела върху немаркирани антитела, открити на предишния етап.

    По този начин се постига двоен контрол на антигените и антителата, повишавайки надеждността на анализа.

    С индиректен ELISA в лабораторията антигенът се фиксира на повърхността на ямката, образува връзки с немаркираната част на антителата.

    Предимства на дуоденалния метод:

    • Двоен контрол на изследвания биоматериал, което значително увеличава точността;
    • Повишена точност и специфичност на самия метод за анализ.

    Този метод обаче отнема много време и включва редица допълнителни стъпки. Точността на изследването обаче е толкова висока, че оправдава този недостатък. Поради тази причина повечето лекари препоръчват метода за дуоденален анализ..

    Къде да отида, колко време да чакам и колко да платя?

    Ако разполагате с всички необходими инструменти и консумативи, можете да получите резултата след 2 дни след доставката. Ако лабораторията разполага с експресна служба за анализ, пробата може да бъде обработена само за 3-5 часа.

    Къде мога да взема ELISA:

    • в държавна клиника;
    • в частни клиники.

    Цените за ензимен имуноанализ директно зависят от нивото на цените в определена клиника, средно цената му е най-малко 4000 рубли.

    Информацията, получена от това проучване, може да бъде полезен принос за медицинската наука, но пациентът трябва да помни, че тъй като цената на ензимен имуноанализ е толкова висока, би било по-разумно да поверите тази процедура на надеждна, проверена във времето клиника..

    За съжаление държавните лечебни заведения не винаги са оборудвани с най-новите науки. Необходимите устройства за висококачествено вземане на проби от биоматериал и неговата обработка в областната клиника може да не са налични.

    И така, как е полезен ензимният имуноанализ за пациента:

    • ви позволява да откриете хелминтска инвазия на ранен етап;
    • в резултат на това ви позволява да започнете лечение своевременно;
    • стабилността на методите прави възможно извършването на анализа с еднаква точност при деца и възрастни.

    Ензимният имуноанализ демонстрира не само качествен, но и количествен фактор, тоест не само показва самия факт на присъствието на хелминти в тялото на пациента, но също така дава възможност да се оцени техният брой.